肿瘤细胞膜模型的建立与抗癌多肽筛选的研究

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1、中山大学博士学位论文肿瘤细胞膜模型的建立与抗癌多肽筛选的研究姓名：温浙盛申请学位级别：博士专业：肿瘤学指导教师：戎铁华2003.5.7墅壁一堕圭竺垡笙壅±壅苎墨肿瘤细胞膜模型的建立与抗癌多肽筛选的研究专业名称：肿瘤学博士生：温浙盛指导教师：戎铁华教授摘要／、、@学药物治疗(化疗)是非小细胞肺癌综合治疗的主要措施之一，传统的经验性化疗方案尽管能取得临床完全缓解或部分缓解疗效，但对患者的生存期并无本质提高，疗效不尽人意。近年来，尽管采用了利用每个患者自身的肿瘤组织进行肿瘤药敏试验，依据筛选出的有效药物进行有针对性的个体性化疗。该方法理论上避免了肿瘤化疗上的盲目性，有可

2、能使非小细胞肺癌患者的生存期得到改善。然而多数临床研究报道均未取得实质性进展，其原因在于目前抗肿瘤药物具有高度诱变性和肿瘤细胞基因本身不稳定，容易导致肿瘤细胞耐药：加上现有的抗肿瘤药物特异性差，副反应大往往由于毒副反应而不得不提前终止化疗。因此开发作用机制完全不同，具有特异性高、副反应低、且能逃避肿瘤耐药机制的新型抗肿瘤新药是当前肿瘤界学者努力探索研究的热点之一。多肽具有抗肿瘤作用，其抗肿瘤机制完全不同于传统抗肿瘤药物，能逃避肿瘤耐药机制，是一种理想的抗肿瘤新药。如何建立一种简便、可靠的寻找抗肿瘤多肽方法是将抗肿瘤多肽应用到临床治疗的前提。用什么方法去寻找抗肿瘤多

3、肽?虽然自然界储存着丰富的多肽，但是要从自然界中进行分离、提取和纯化，既费时而且很温浙盛博士学位论文中文摘要盲目。结果自然是成本高，产量低。依据抗肿瘤多肽结构特性进行抗肿瘤多肽设计是一种较好的寻找新的抗肿瘤多肽方法，但也受到现有抗肿瘤多肽信息和设计数量限制的不足。因而利用重组基因技术和肿瘤细胞膜模型进行抗肿瘤多肽筛选，就成为了寻找抗肿瘤多肽的一项新的研究课题、／／研究目的：(1)确立合适的肿瘤细胞膜模型和理想的多肽表达系统。(2)应用确立的肿瘤细胞膜模型和多肽表达法，筛选特异性抗肿瘤多肽，检测筛选多肽的体外抗肿瘤效果，以企建立一种简便、可靠的寻找抗非小细胞肺癌多肽

4、的方法。材料与方法：c1)选择穿孔多肽Mast21和MastoparanX作为对照多肽，分别应用噬种体表达法(phagedjsplay)和核糖体表达法(ribosomedisplay)表达。组建含不同成份和比例脂质作为肿瘤细胞膜模型检测筛选抗肿瘤多肽的可行性，确立合适的肿瘤细胞膜模型和多肽表达法。(2)利用重组基因技术组建可直接用于体外多肽表达的DNA库，应用确立的多肽表达法进行表达。将表达的肽库与确立的肿瘤细胞膜模型接触，筛选出特异结合的多肽，应用MTT法检测筛选的多肽在体外抗肿瘤效果。r—3结果：(1)应用噬种体表达法筛选的Mast21和MastoparanX

5、均出现长片段的缺失突变，而核糖体表达法和脂质体(PE／PS，3：7)作为肿瘤细胞膜模型可以筛选出穿孔多肽Mast21和MastoparanX。温浙盛博士学位论文中文摘要(2)利用核糖体体外表达法和脂质体(PE／PS，3：7)细胞膜模型成功地从设计的肽库中筛选出一些肽连，体外试验证实部分多肽能抑制非小～细胞肺癌细胞珠(NCI—H460)生长。}7一∥结论：(1)噬种体表达法因为是借助于活细胞，存在转化效率和表达多肽本身对宿主细胞毒性的限制，不适合于穿孔多肽的筛选。核糖体表达法不受细胞转化效率的限制，对宿主无毒性，是理想多肽表达系统。脂质体(PE／PS，3：7)是目前

6、发现比较合适的肿瘤细胞膜模型，结合核糖体表达法。能成功筛选出穿孔多肽。(2)合适的肿瘤细胞膜模型和核糖体表达法，使从肽库中筛选特异抗肿瘤多肽成为可能。从而有望建立一种简便、可靠的寻找抗肿瘤多肽方法。开发作用机制完全不同能逃避肿瘤耐药机制的抗肿瘤新药。关键词：肿瘤细胞膜模型，噬种体表达法，核糖体表达法，抗肿瘤多肽筛选温浙盛博士学位论文英文摘要ExperimentalStadyOnTheConstructOfTumorCellModelMembraneAndScreeningUpSpecificAnti—TumorPeptidesMajor：OncologyDocto

7、rateCamdodate：WenZheshengSupervisor：Prof．RongTiehuaAbstractChemotherapyisoneofthemainmodalityfornon-smallcelllungcancer(NSCLC)，howevernosurvivalperiodincreasecouldbeobtainedinthiswayeventhoughshort-termcompleteresponsehavebeenreceived．Duringthepastdecades，manypapersreportedthatindivid

8、ualad