嗅球成鞘细胞体外培养、鉴定、神经营养和成髓鞘作用的研究

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1、中山大学硕士学位论文嗅球成鞘细胞体外培养、鉴定、神经营养和成髓鞘作用的研究姓名：黄晓芳申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：谢富康2003.5.30堕堡壁塑塑堕堡!!堕董：鉴塞：塑丝箜鲞塑壁塑塑堡旦塑堑壅一——一—————j墼生—一嗅球成鞘细胞体外培养、鉴定、神经营养和成髓鞘作用的研究硕士研究生：黄晓芳导师：谢富康教授中山大学中山医学院组织胚胎学教研室，广州510080摘要，《长期以来，中枢神经系统损伤后再生一直是困扰医学界的难题。目前研究发现，中枢神经轴突再生困难的原因并非是神经元自身的原因，而是轴突周围胶质环境抑制

2、轴突再生。嗅神经终身具有再生的能力，这种能力与嗅神经通路上特殊的胶质细胞——嗅球成鞘细胞(0ECs)有密切关系。嗅球成鞘细胞既具有某些施万细胞的性质，同时又有星型胶质细胞的某些特质。已有研究证明，这种细胞无论在体内还是体外都能促进轴突的生长；移植体内后，能在轴突周围形成髓鞘上本课题的研究目的是探讨嗅球成鞘细胞体外培养、纯化和增殖的方法，构建成髓鞘的体外模型，为研究髓鞘的形成过程和机制提供途径，为进一步研究嗅球成鞘细胞在中枢神经再生中的应用提供基础资料。厂＼第一部分：获取新生sD大鼠嗅球神经纤维层，酶消化法制成细胞悬液，阿糖胞

3、苷纯化，DMEM／F12+10％FCS和DMEM／F12+B27培养液交替培养，加牛垂体提取液(BPE)促增殖，一周后行神经胶质细胞特异性抗原GFAP，S--100和髓鞘碱性蛋白(MBP)免疫组化鉴定。结果：嗅球成鞘细胞形态与施万细胞相似，其特点是突起细长且直，呈针样。经纯化后的OECs纯度可达95％以上。细胞呈GFAP(+)(95％)，S一】00(+)(83％)和MBP(+)(90％)。第二部分：联合培养新生大鼠嗅球成鞘细胞和背根节神经元作为实验组，联合培养施万细胞和背根节神经元为对照组1，单独培养背根节神经元为对照组2。

4、培养5天，7天，10天后，行GAP--43免疫组化染色，分别计数各组阳性细胞数，通过图象分析测量各组GAP--43阳性细胞初级突起长度，统计学分析比较嗅球成鞘细胞体外培养、鉴定、神经营养和成髓鞘作用的研咒摘要各组阳性细煦数、阳性细胞率和神经元初级突起长度。结果：培养5、7、10天时，实验组单位面积(o．25ram2)内的阳性纫胞数分别为43、39、28；对照组】阳性细胞数分别为44、3l、14；对照组2为43、12、3。实验组阳性细胞率为92．98％、31．23％、24．87％；对照组1为92．59％、23．17％、15．0

5、6％。培养5、7、10天神经元初级突起长度，在实验组分尉为65611m、712um、834um；对照组1为643扯m、67]pm、752um。各组之间有显著性差异。和胶质细胞联合培养的神经元的存活情况明显优于单独培养的神经元。神经元和嗅球成鞘细胞联合培养比和施万细胞联合培养存活率高，初级突起长度长。说明嗅球成鞘细胞对神经元的促进作用更佳。第三部分：联合培养新生大鼠嗅球成鞘细胞和背根节神经元，培养2、3、4周透射电镜观察髓鞘形成情况。结果：培养3周后，轴突周围有髓鞘形成，髓鞘层次随培养时间延长而增多。L，总结三部分实验结果，得

6、到以节结论：／1．从新生大鼠嗅球的神经纤维层分离培养的嗅球成鞘细胞能表达GFAP、S100和MBP，OECs是一类不同予施万细胞和星型胶质细胞的胶质细胞。2．OECs和背根节神经元联合培养，能促进神经元的存活和突起的生长。3-OECs和塑童蹩元联合培养，能够在轴突周围形成髓鞘。【关键词】嗅球成鞘细胞：联合培养；髓鞘：神经突起坚堡堕塑塑堕笪!!苎茎：笙塞：!!丝笪茎塑垡堡塑笪塑堕竺窒一———————萎苎塑兰一Thestudyofcellculture，identificationofolfactoryensheathingce

7、llsandtheirneurotrophicfunctionandmyelinationMasterCandidate：HuangXiaofangSupervisor：XieFukangDepartmentofHistologyandembryology,SunYat-senMedicalCollege,SunYat-senUniversity,Guan舀zhou510080AbstractAxonalregenerationinthelesionedmammaliancentralnervoussystem(CNS)is

8、usuallyabomve．ThefailureoftheregenerationoftheCNSisnotduetotheneurons．butthemicroenvironment．TheolfactorybulbisanexceptionalCNStissue．Unlikeother