HIV感染的实验诊断

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1、HIV感染的实验诊断白立石北京市疾病预防控制中心艾滋病确认中心2008年5月一、HIV感染后的免疫和病毒学HIV的基因组结构和蛋白基质衣壳核衣壳表面糖蛋白跨膜糖蛋白蛋白酶反转录酶整合酶HIV结构基因,有3个env(核苷酸5781--8360)编码包膜蛋白p160、120、41等。gag(核苷酸310--1860)编码病毒核心/衣壳蛋白p55、24、15、17；pol(核苷酸1629--4673)编码逆转录酶(RT)、p66、51、32、11等；HIV调节基因,有6个tat:上调mRNA,促病毒复制-启动rev:调节病毒mRNA-开关vif:增强

2、出芽,释放新病毒颗粒-感染因子nef:下调mRNA,抑病毒复制-制动vpu:仅见于HIV-1,功能不详；vpx:仅见于HIV-2,功能不详。5days脑部：巨嗜细胞和胶质细胞淋巴系统:胸腺淋巴结脾脏肠道：嗜铬细胞前列腺精液阴道黏液骨髓肺胞巨嗜细胞血液细胞积存:CD4+T淋巴细胞巨嗜细胞胶质细胞嗜铬细胞Imagefrom:KahnandWalker,M.D.NEJM1998,Volume339:33-39July2感染HIV后的血清学变化HIVRNA浓度p24AgP24AgAnti-gp41,120,160Anti-p24,55感染1周2周6周

3、12周8－10年急性期潜伏期艾滋病期检出线HIV-1早期感染病毒标志物的动态观察HIVRNAHIVp24antigenHIVantibodies窗口期血浆RNAP24前病毒DNAHIV抗体:ELISAHIV抗体:WBHIV感染者的三种临床转归VirusCD4CD8aHIVCD4CD4CD8CD8aHIVVirusVirus典型8－10y快速:4-5y:(2%)缓慢/长期不进展:>10y:(2%)二、HIV酶联筛查检测方法和试剂※感染急性期，窗口期※检测试剂以ELISA为主，还有PA，斑点免疫胶体金和免疫层析。※ELISA试剂为HIV1/2型，包

4、括M和O组，N组不包括但很少。※三四五代酶联试剂的差异和使用策略：三代成熟质量稳定，窗口期20d;四代提前4－9d，质量不稳定，用于血站急性感染的检测。※筛查试验和确认试验的差异：酶联试验敏感性高于确认试验，四代试剂敏感性更高，确认阴性的不一定是真阴性。（一）HIV抗体ELISA检测试剂（血液）第三代：双抗原夹心法，可检测所有类型抗体，由于能检出IgM抗体，缩短了窗口期，有报道说较第二代产品平均可提前5天作出诊断。第四代：双抗原（抗体）夹心法，将HIVP24抗体和HIV抗原同时包被，再加入待检血清，最后加入酶标记的HIV抗原和HIVP24单克隆

5、抗体，同时检测血清中的HIVP24抗原和HIV抗体。第五代：HIV抗体和P24抗原实现分别检测，真正实现早期诊断。FourthGenerationThirdGenerationSecondGenerationIgMIgG各种HIV检测方法平均窗口期方法平均天数第2代EIA45第3代EIA22P24抗原16HIVRNA11（二）、检测试剂的质量指标灵敏度诊断试验的灵敏度有两个不同意义：1．代表一个试验能检测最少量被分析物（如抗体）的能力。通常可对阳性血清进行稀释以确认哪个试验更敏感。2．指某试验检出阳性的能力（无假阴性）。一个试验有可能检出很少量

6、的某抗体，但也可因试验中缺少适当的抗原而漏掉一些阳性样品。2．特异性指某试验正确鉴定所有阴性的能力（无假阳性）。大部分HIV筛查试验不是100%特异，可用公式计算真阴性特异度=————————100%真阴性+假阳性注：公式中真阴性指试验中所能检测的真阴性数。如100份血清，5份真阳性，95份真阴性，与参考试验比较，某试验检出6份阳性（一份假阳性），则特异性=94/(94+1)×100%=98.9%3．试验效率指某试验正确鉴定所有阳性和阴性的总体能力（无假阳性或假阴性），是灵敏度和特异性的综合指标，反映了该试验的总的效率。真阳性+真阴性试验效率

7、=—————————————100%真阳性+假阳性+真阴性+假阴性注:公式中真阳性和真阴性指试验数目。在以上例子中，检测100份血清，5份真阳性，95份真阴性，1份假阳性，1份假阴性，因此4+94试验效率=————————100%=98%4+1+94+14．预测值预测值与以上的参数不同，它描述的是考虑了被检人群中感染的流行因素后的试验评价。阳性预测值（PPV）：定义为在所有阳性结果人群中感染个体所占比例。阴性预测值（NPV）：定义为在所有阴性结果人群中未感染个体所占比例。真阳性阳性预测值=————————100%真阳性+假阳性真阴性阴性预

8、测值=————————100%真阴性+假阴性注：公式中真阳性和真阴性指试验数目。⑴在感染流行率较高（5%）的人群中1000人受检：50份真阳性（已感