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1、第二章 细菌感染的实验诊断感染的诊断有赖于从标本中检出病原体或检出病原体的可溶性抗原,或病原体的DNA病人血清中检出病原体的抗体本章主要讨论检出病原体的问题第一节实验诊断的目的与要求进行病原学诊断进行药敏试验,指导合理用药用作流行病学调查,追踪传染源研究病原生物与感染的关系一.目的鲍氏痢疾志贺菌13型暴发时间：1992年9月发病：26名死亡：10名地点：某婴儿室传染源：慢性携带者产妇传播方式：通过污染操作台接触鼠伤寒暴发时间：1991年11月地点：某婴儿室发病：55名死亡：23名56件物品（被褥，尿布，奶瓶）中26件检出鼠伤寒沙门菌二.诊断试验的选择有价值的快速简便的
2、特异性和敏感性高的可用的方法:查病原体:直接涂片分离,对纯培养物进行鉴定查可溶性抗原:用已知抗体查DNA:分子生物学方法查抗体:用已知抗原IgMIgG:效价有4倍以上增高三.细菌鉴定流程双歧检索:以某一试验分表解:用多种试验整体分析数字编码:将多种试验分别编码,数字化后查表革兰氏阴性杆菌葡萄糖发酵+-氧化酶+-弧菌肠杆菌非发酵菌ABCDE甲乙丙丁++--++++----++--+-++组别试验代码结果结果代码总值1A4-01B2-0C1+12D4+45E2-0F1+115…微量生化反应系统和自动化各试验孔含不同试验的脱水底物加入纯化的被检菌孵育4-24h观察结果人工读
3、取根据编码资料判定菌种或电脑读取第二节临床标本的采集与处理一.标本采集的原则早期,用抗菌药物前根据病原体存在的部位采集相应标本无菌技术,避免正常菌群污染,防止病原体播散采用合适的方法二.标本的处理尽快接种到合适的培养基上根据抵抗力选择保存和运输条件厌氧菌奈瑟菌病毒第三节细菌的形态学检查一.不染色标本用悬滴法或压片细菌是活的,可观察运动加入特异抗体可抑制其运动结合标本来源可作初步诊断,如霍乱,梅毒用相差或暗视野显微镜效果更好压片悬滴法二.染色标本革兰染色(Gramstain):紫色革兰阳性;红色革兰阴性.注意细菌的大小,形状,排列以及着色的均一性抗酸染色(acid-fa
4、ststain):红色抗酸阳性,蓝色抗酸阴性荧光染色:更易观察特殊染色可用于观察荚膜,鞭毛等细菌的特殊结构第四节细菌的分离培养一.细菌生长的要求培养基:营养物质,pH7.4气体:需氧菌,厌氧菌,兼性厌氧菌,微需氧菌温度:一般37°C时间:一般18~24h二.培养基1.对培养基的基本要求足够的营养物质合适的pH无菌澄清2.培养基的种类按培养基成分分:基础培养基:满足一般细菌要求营养培养基:满足苛求细菌要求鉴别培养基:加有被利用物和指示剂选择培养基:加有抑制剂,能抑制非目的菌生长特殊培养基:满足特殊细菌要求按培养基物理性状分:液体:增菌固体:加2%琼脂,平板用于分离纯种,
5、斜面用于传代或保存细菌半固体:加0.5%琼脂,用于观察动力,保存菌种三.主要的接种方法分区划线法:用于分离纯种,多次烧灼减少菌数,以获取单个菌落连续划线:不要求单个菌落,用于保存或繁殖细菌涂布:使细菌长成菌苔,可观察细菌被抑制情况或用于繁殖细菌倾注平板:少量细菌混于琼脂中倒板,计数,分离纯种四.细菌生长的表现固体基:菌落形成,注意其大小,形状表面,边缘质地,透明度溶血情况液体基:浑浊,菌膜,沉淀五.纯种的获得纯种是细菌学工作的基础获得方法:划线分离法(倾注平板法)获得大的单个菌落斜面纯培养物纯培养物的外观表现应是一致的六.培养细菌的目的确定有无细菌鉴定细菌药敏试验计数
6、细菌利用细菌:制备菌苗,生产抗生素或基因工程产品第五节细菌代谢产物的检测一.细菌毒素的检测内毒素:致热作用:兔体温鲎试验外毒素:体内:毒素与抗毒素的中和试验体外:Elek平板法:沉淀反应ELISA毒素和抗毒素的中和试验外毒素?外毒素?+已知抗体小白鼠小白鼠结果发病发病有毒性,但不是相应的发病不发病是相应毒素不发病不发病无毒性抗毒素待测细菌沉淀线Elek试验二.生化反应欲检测细菌的生化反应,一般是在合适的培养基中加入被测物和检测其代谢产物的试剂,即在鉴别培养基中进行培养,或直接加试剂于培养物中,观察呈色等现象判定结果(一)碳水化合物的代谢试验糖(醇)发酵试验:酸,气体氧
7、化-发酵(O/F)试验:ß-半乳糖苷酶(ONPG)试验七叶苷水解试验甲基红试验V-P试验(二)蛋白质和氨基酸的代谢试验明胶液化试验Indol试验Ura试验H2S试验苯丙氨酸脱氨酶试验氨基酸脱羧酶试验(三)碳源氮源利用枸橼酸盐利用试验丙二酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验(四)酶氧化酶试验过氧化氢酶试验硝酸盐还原试验卵磷脂酶试验凝固酶试验CAMP试验胆汁溶菌试验(五)抑菌试验O/129试验杆菌肽试验Optochin试验第六节感染的血清学检测已知抗体检测细菌的抗原用于鉴定细菌已知抗原检测病人血清中的抗体用于诊断感染性疾病一.血清学鉴定了解微生物的抗原结构用已知
