细菌感染的实验室诊断ppt培训课件

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1、细菌感染的病原学检查赵一鸣2015.1.5第一节标本的采集和处理原则一、标本采集的一般原则1.早期采集2.无菌采集无菌部位:严格无菌操作有正常菌群部位：明确目的菌；选择合适的选择培养基3.采用不同方法采集需氧菌或兼性厌氧菌厌氧菌：穿刺法采集4.采集适量标本和适当标本采集有明显病变的标本根据病程采集不同的临床标本5.安全采集二、标本的处理1.及时送检2.运送与保存1）根据待检菌特点对标本进行冷藏、保温或保持厌氧状态2）注意安全防护第二节细菌形态学检查显微镜种类1.普通光学显微镜（lightmicrosco

2、pe）光源：可见光2.暗视野显微镜（darkfieldmicroscope）暗背景，菌体发光用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察3.相差显微镜检查不染色活细菌的形态及某些内部结构4.荧光显微镜光源：100W~200W的高压汞灯5.电子显微镜透射电镜：观察细菌内部超微结构扫描电镜：对细菌表面结构及附件观察（一）常用染料1.碱性染料电离后色基带正电荷细菌染色常用，如美蓝、结晶紫、碱性复红等2.酸性染料用于细胞浆染色，如伊红、酸性复红、刚果红3.复合染料（中性染料）碱性染料与酸性染料的复合物，如瑞氏染料、姬

3、姆萨染料等4.单纯染料如苏丹染料，溶于脂肪溶剂，不溶于水，化学亲和力低（二）常用的细菌染色法单染色法只用一种染料，如吕氏美蓝复染色法用两种或两种以上不同颜色的染料细菌染色的一般程序1.涂片2.干燥：自然干燥为好3.固定4.初染5.媒染媒染剂6.脱色脱色剂7.复染1.革兰染色法（Gramstain）（1）原理1）细胞壁学说：两种细菌细胞壁通透性不同（2）方法：制片→结晶紫初染→碘液媒染→酒精脱色→复红复染→结果革兰阳性菌﹙G＋﹚：紫色革兰阴性菌﹙G－﹚：红色（3）影响染色结果的因素1）操作技术：涂片和脱色2）染色

4、液：3）细菌：18~24h培养物为好（4）意义:1）鉴别细菌2）选择药物3）与致病性有关2.抗酸染色法细菌着色后不被盐酸酒精脱色的染色方法染料：石炭酸复红、盐酸酒精、美蓝方法初染：5%石炭酸复红加热染色5min脱色：3%盐酸酒精复染：吕氏美蓝3.荧光染色4.特殊染色法细胞壁染色、荚膜染色、芽胞染色、鞭毛染色、异染颗粒染色5.负染法背景着色肺炎链球菌荚膜染色墨汁负染法芽胞染色第三节细菌分离培养和鉴定一、培养基的种类和选择培养基（culturemedium）由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制

5、品。（一）培养基的组成成分1.营养物质碳源、氮源、无机盐、水、生长因子（1）蛋白胨提供氮源植物胨:大豆动物胨：牛肉、动物组织等（2）肉浸液碳源、氮源（3）牛肉膏氮源（4）糖（醇）类碳源和能源（5）血液提供特殊生长因子、观察溶血（6）无机盐类常用元素：P、S、K、Na、Mg、Ca、Fe等微量元素：Co、Zn、Mn、Cu、Mu等（7）鸡蛋与动物血清用于某些特殊培养基（8）生长因子维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等2.凝固物质即赋形剂（1）琼脂（2）明胶动物胶原组织熬制而成3.抑制剂和指示剂（1）抑制剂：胆盐、煌绿、染料、

6、抗生素等选择培养基：加入一定种类的抑制剂，以抑制杂菌生长或减少生长，有利于检出菌生长的培养基。（2）指示剂：酚红、中性红、中国蓝等鉴别培养基：加入特定底物和指示剂（二）培养基的种类1.按培养基的物理性状（1）液体培养基：增菌（2）固体培养基：纯化，增菌（3）半固体培养基：动力检测，保种液体培养基固体斜面培养基半固体培养基2.按营养成分和用途分类（1）基础培养基：只有基本营养成分（2）营养培养基：加有血液、血清等（3）鉴别培养基：含有特定底物和指示剂（4）选择培养基：含有抑制剂（5）特殊培养基：厌氧、细菌L型（三

7、）培养基的选择1.血平板最常用2.巧克力血平板奈瑟菌属、流感嗜血杆菌3.肠道选择培养基分离肠道细菌常用中国蓝、EMB、MAC、SS4.碱性琼脂或TCBS分离霍乱弧菌5.血液增菌培养基血液、骨髓增菌用6.营养肉汤增菌用（四）培养基的制备1.常用各种器具灭菌前的准备（1）培养皿：用纸包裹（2）试管：加塞后用纸包好（3）吸管和毛细管（4）烧瓶2.培养基制备的一般程序（1）调配根据培养基组成，准确称取各组分，先加需要蒸馏水的一部分，再加培养基干粉，最后补足水量。（2）溶化液体培养基不需加热（3）调整pH值一般7.2~7

8、.6（4）过滤澄清（一般可以省略）液体培养基：滤纸固体培养基：纱布（5）分装平板：灭菌后冷却至50℃~60℃时倾倒90mm25~30ml（4mm）：药敏用90mm13~15ml(3mm)：培养用琼脂斜面：分装量为试管的1/4~1/3，灭菌后趁热制成斜面，斜面长度2/3高层、半固体、液体：分装量为试管长度1/4~2/3（6）灭菌高压蒸汽灭菌无糖：103.4kPa121.3℃15~30mi