hiv感染实验室检测

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1、艾滋病感染实验室检测郭志宏浙江省疾控中心电话/传真:0571-87235046Email:zhhguo@cdc.zj.cnHIV相关检测目的1.临床诊断2.安全输血3.流行病学调查、高危人群监测4.自愿咨询检测VCT5.抗病毒治疗后效果检测6.抗病毒治疗耐药性检测7.免疫功能测定2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班HIV感染的实验室检测方法常用HIV病原学检测方法:1.核酸检测（cDNA测定-PCR、RNA测定-病毒载量）2.病毒培养分离3.P24抗原检测常用HIV抗体检测方法:初筛：1

2、.酶联免疫吸附法ELISA：第三代、第四代2.快速检测RT：金标、硒标3.简单法PA:明胶颗粒凝集确证：免疫印迹法WB:（WesternBlot）、RIBA其他相关检测方法:免疫功能测定：CD4/CD8检测2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班（一）HIV核酸检测1.HIV核酸定性检测：通常使用PCR或RT-PCR技术，用于HIV感染的辅助诊断。2.HIV核酸定量检测：使用RT-PCR,NASBA,bDNA等技术，常用于监测HIV感染者的病程进展和抗病毒治疗效果。2006年10月12日浙江

3、省艾滋病治疗培训班核酸检测特点：①能够用于常规不能培养和分离的病毒的检测（如HBV、HCV、HIV等）；②仅需少量标本或标本中仅含少量病毒也能检测；③在病毒感染的急性期抗体尚未出现之前，病毒感染的诊断主要依靠NAT，适用于早期诊断；④可对病毒进行定量检测，有助于疗效监测；⑤可对病毒基因进行基因分型，比血清分型更有价值；⑥通过对病毒耐药基因的检测，可预测或发现病毒的耐药性；⑦可用于先天性或围产期获得性病毒感染的诊断；⑧灵敏度高（可达ng甚至fg水平，理论上能检出单个病毒基因），特异性好、快速、简捷

4、。2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班定量NASBA技术：是由一对引物引导的，连续均一的体外特异核苷酸序列的等温扩增的酶促反应过程。优点：操作十分简单，只需将制备好的模板直接加到反应体系中，恒温41℃培育1.5～2小时，即可将模板扩增109倍。NASBA反应体系包括AMV反转录酶、RNA酶H、T7RNA聚合酶、核糖核苷三磷酸、脱氧核糖核苷三磷酸、两个特异的引物及适宜的缓冲液。NASBA的反应分为两相：循环相和非循环相。2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班NASBA图解引物1逆转录

5、酶RNA酶H逆转录酶引物2T7RNA多聚酶引物2逆转录酶逆转录酶RNA酶H引物1liniarphaseamplificationphase2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班PCR反应图解2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班bDNA信号扩增技术主要包括分枝DNA检测（branchedDNAassays）和杂交捕获检测（hybridcaptureassays）。检测时病原模板并不扩增，而是通过对检测信号的放大来实现对病毒核酸的检测和定量。2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班

6、bDNAHIV核酸检测的反应原理2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班核酸检测主要应用：1）早期诊断围产期HIV感染的辅助诊断：宫内感染（检测定义）：新生儿出生48小时内，检测到病毒核酸，或病毒培养阳性，则提示孕期（宫内）感染。对围产期感染儿童在18月龄前的早期诊断，目前以2次核酸检测结果作为辅助诊断的依据。2次不同时间的样本核酸检测均为阳性提示为HIV感染，均为阴性提示未感染。同时18个月时做抗体检测，当18个月HIV抗体确证阳性方可诊断HIV感染。2006年10月12日浙江省艾滋病治疗

7、培训班核酸检测主要应用：2）对18个月婴儿HIV抗体WB试验的不确定（或可疑）结果进一步做辅助诊断；3）在HIV抗体未产生之前（窗口期）辅助诊断急性原发感染；4）HIV亚型分析；确定人群中HIV的变异；5）监测临床抗病毒药物治疗效果；6）检测病毒的耐药性突变。2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班（二）HIV病毒分离培养将病人淋巴细胞与正常人的淋巴细胞共同培养，适当周期培养后测定培养液HIVp24抗原/RT，从而判断病人的淋巴细胞是否受到HIV感染。细胞培养与血清学方法相比，专一性很强，不

8、会出现假阳性。但其敏感性不如血清学或PCR。必须在P3级生物安全实验室进行。2006年10月12日浙江省艾滋病治疗培训班HIV病毒分离培养的应用1.能得到最原始的临床毒种，其重要意义在于确认对WB不确定的可疑感染者及母婴传播、婴幼儿HIV感染者。对法律纠纷或职业暴露明确毒主株亲缘关系。2.毒株可用于抗病毒药物筛选，耐药性及其生物学特性等研究。3.用定量细胞培养法可测定细胞的半数感染单位（TCID50）和半数抑制药物浓度（IC50）用于抗病毒药物测定。或消毒杀菌药品的效果评价。本法一般不用于常规诊