香菇多糖对荷瘤鼠白细胞介素2和白细胞介素6表达及肿瘤细胞周期影响的研究

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1、香菇多糖对荷瘤鼠白细胞介素-2和白细胞介素-6表达及肿瘤细胞周期影响的研究作者：林卡莉，徐鹰，黄志华，张生枝【摘要】目的探讨了香菇多糖对IL-2和IL-6表达及肿瘤细胞周期的影响。方法昆明小鼠随机分为4组：正常对照组，肿瘤（S180）模型组，肿瘤环磷酰胺组，肿瘤香菇多糖组。放免法检测各组小鼠血清IL-2和IL-6水平、镜下观测计算小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、流式细胞仪检测肿瘤细胞周期。结果香菇多糖可使荷瘤鼠IL-2含量升高(P<0.01)，IL-6含量降低(P<0.01)；香菇多糖可提高荷瘤鼠腹腔

2、巨噬细胞吞噬率（P<0.01）和吞噬指数（P<0.01）；使Gl期细胞增多，S期和G2／M期细胞减少，使肿瘤细胞的增殖指数明显下降（P<0.01）。结论香菇多糖可抑制荷瘤机体Th1/Th2细胞的平衡向Th2细胞漂移，活化巨噬细胞功能，减低肿瘤细胞的增殖指数。【关键词】香菇多糖；S180；细胞周期；白细胞介素-2；白细胞介素-6　我们之前的研究已证实，香菇多糖(lentinan,LNT)能使荷瘤鼠脾指数增加,8脾白髓相对面积及脾小体个数明显增加；能增加胸腺树突状细胞数量及促进其分化成熟；使外周血淋巴

3、细胞数量显著增加；影响荷瘤机体T细胞亚群的比例，促使荷瘤机体C细胞的增殖与活化，诱导细胞毒性T细胞的产生，最终直接或间接杀伤肿瘤细胞［1，2］。本实验探讨香菇多糖对荷瘤鼠血清IL-2和IL-6表达及肿瘤细胞周期的影响，以期为香菇多糖的抗肿瘤作用提供更多的依据。　　1材料与仪器　　小鼠S180细胞株（Sarcoma180）由中国医学科学院医药研究所购进，本院科研中心传代培养。注射用香菇多糖：南京康海药业有限公司产品。环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司生产。细胞周期流式分析试剂盒，购自上海杰美基因医药科技有限公司。IL

4、-2和IL-6（放免）试剂盒，购自北京福瑞生物工程公司。SN-695型放免γ测量仪：上海核福光电仪器有限公司产品。BDCalibur流式细胞仪，美国BectonDickinson公司产品。Olympus显微镜。SPSS14.0统计软件包。　　清洁级昆明小鼠40只，雌雄各半，6～8周龄，体质量20～24g，购自江西中医学院实验动物中心，卫生许可证号：SCXK（赣）2006-0001，实验动物质量合格证号：JZDW2008-0205。　　2方法　　2.18荷瘤S180鼠模型的建立按本课题组既往操作程序制作［1］。　　2

5、.2动物分组及处理　　小鼠随机分为4组。第Ⅰ组为正常对照组，右前腋皮下注射0.2ml生理盐水，9d后处死；第Ⅱ组为肿瘤模型组，第Ⅲ组为肿瘤环磷酰胺组，第Ⅳ组为肿瘤香菇多糖组，后3组于接种肿瘤后第2天始分别每日腹腔注射生理盐水0.2ml，环磷酰胺(Cyclophosphamide,CYP)0.2ml（每只每次1mg），以及香菇多糖0.2ml(每只每次0.025mg)，共7次。均于最后1次给药后第2日处死。　　2.3血清IL-2和IL-6的测定小鼠摘除眼球取血置抗凝管中，分离血清，-70°C保存。严格按试剂盒操作程序检

6、测血清IL-2和IL-6的水平。　　2.4小鼠腹腔巨噬细胞(macrophage，Mφ)吞噬功能的测定取材前1天所有小鼠腹腔注射2%无菌淀粉1ml。取材当日小鼠腹腔注射5%鸡红细胞（chickenredbloodcell,CRBC）1ml，30min后，腹腔注射PBS1ml，轻轻按揉腹壁1min，吸出腹腔液滴片。置37°C湿盒孵育30min后，用PBS冲洗，去除未贴壁Mφ和游离CRBC，纯甲醇固定7～8min，自然晾干，用瑞士染液进行染色。在显微镜高倍镜下观察，每张片随机计数200个Mφ中吞噬CRBC的Mφ8数及吞

7、噬的CRBC总数。并计算Mφ的吞噬百分率和吞噬指数。计算公式为：吞噬百分率（%）=吞噬CRBC的Mφ总数/观察到的Mφ总数×100%；吞噬指数=被吞噬的CRBC总数/观察到的Mφ总数。　　2.5肿瘤细胞周期的测定剥离肿瘤后，取适量剪碎，胰蛋白酶消化30min，以含血清培养基终止反应，经研磨后200目过滤，PBS离心洗涤3次后，200目过滤，调整细胞浓度为5×106/ml，4℃待测。检测时，取5×105个细胞，按流式细胞仪操作规程上机检测。并用美国BD公司提供的相关软件将所得数据进行曲线拟合分析，计算相应的DNA含量

8、，根据DNA含量的变化，得出细胞周期中各期细胞（G0/G1期，S期，G2/M期）的百分比及计算增殖指数（PI）。　　PI（%）=S+G2/MG0/G1+S+G2/M×100%　　2.6统计学处理实验数据以±s表示，采用SPSS14.0统计软件包进行统计学分析。经正态性检验和方差齐性检验满足正态分布和方差齐同后作单因素方差分析，组间差异用SNK方法检测。　　3