翡翠贻贝多糖治疗宫颈癌荷瘤裸鼠及对免疫系统和p53mrna表达的影响

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1、翡翠贻贝多糖治疗宫颈癌荷瘤裸鼠及对免疫系统和p53mRNA表达的影响何冬梅1袁希福2李江滨3(1惠州市屮医医院广东惠州516001)(2上海希福抗癌免疫研宂所200092；3广东医学院广东东莞523808)【摘要】目的观察翡翠贻贝多糖治疗宫颈癌荷瘤裸鼠及对免疫系统和P53mRNA表达的影响。方法建立宫颈癌荷瘤裸鼠模型，观察翡翠贻贝多糖对荷瘤小鼠的抑瘤率及对T淋巴细胞增殖能力、血淸G介素2(IL-2＞、瘤体组织p53基因mRNA表达等指标的影响。结果翡翠贻贝多糖高(0.5g/kg)、屮(0.1g/kg)剂量可明显抑制

2、荷瘤裸鼠瘤体的生长(P<0.01),提高T淋巴细胞增殖能力和IL-2的产生(P<0.01),但对p53基因mRNA表达无显著影响(P>0.05)o结论翡翠贻贝多糖可显著抑制宫颈癌荷瘤裸鼠瘤体的生长，并能增强荷瘤裸鼠的免疫功能。【关键词】翡翠贻贝多糖宫颈癌免疫系统p53基因【屮图分类号】R730.5【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2012)16-0074-02宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤，近年來宫颈癌的发病年龄趋向年轻化，成为严重威胁屮青年妇女健康的重大妇科肿瘤疾病之一。翡翠贻

3、贝多糖(PVPS)是从海洋双壳贝类翡翠贻贝肉屮提取的多糖成分。翡翠贻贝是海产双壳贝类，其药用和食疗功效显著，从屮提取到的多种活性成分具有抗菌、抗病毒，抗炎，抗氧化，抗肿瘤等作用［1］。前期研究发现由翡翠贻贝肉制备的多糖对体外培养的宫颈癌细胞生长具有抑制作用［2］。为进一步探讨翡翠贻贝多糖的体内治疗宫颈癌的作用，本研宂观察Y翡翠贻贝多糖治疗宫颈癌荷瘤裸鼠及对免疫系统和p53mRNA表达的影响。1材料与方法1.1材料翡翠贻災多糖(PVPS)，上海希福抗癌免疫研究所提供；宫颈癌Hela细胞株，广东医学院衰老研究所提供；B

4、ALB/c裸小鼠，雌性,4-6周龄，体重14-18g,广东医学院实验动物中心提供；噻唑蓝(MTT)、刀豆蛋白A(ConA),Sigma公司；DMEM培养基，Gibco公司；小牛血清，杭州四季青试剂公司；5氟尿嘧啶(5-FU),上海旭东海普药业有限公司；IL-2ELISA试剂盒，eBioscience公司；TRIzol试剂，Invitrogen公司;逆转录试剂盒、焚光定量PCR试剂盒(SYBRGreen法)，TaKaRa；p53引物、β-actin引物，上海生工生物工程技术公司。C02恒温培养箱，Sanyo

5、公司；多功能酶联反应仪，Bio-Tek公司。焚光定量PCR仪，ABI。1.2方法1.2.1细胞培养、荷瘤模型裸鼠建立与分组40mg/kg用含10%小牛血清的DMEM培养基在5%CO2、37°C饱和湿度条件下培养宫颈癌Hela细胞，收集对数生长期的细胞，接种于裸鼠右前肢腋窝处皮下，每只裸鼠接种5×106个细胞。无特定病原体(SPF)环境饲养裸鼠，并观察裸鼠生长状态及肿瘤生长情况，以皮下结节直径>0.5cm为成瘤标准。接种次日按体重将小鼠随机分成5组，每组12只，分别为空白对照组、5-FU组(O.lg

6、/kg)、翡翠贻W多糖高(0.5g/kg)、中(O.lg/kg)、低(0.02g/kg)剂量组。每天每鼠灌胃给药O.lmL,连续30天。1.2.2对荷瘤裸鼠的体内抑瘤作用末次给药24小时后摘眼球取血，分离血清待测，然后处死小鼠后剥离瘤体，称量瘤体湿重，计算抑瘤率，抑瘤率=(对照组平均瘤重-实验组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%。1.2.3对荷瘤裸鼠免疫功能的影响按参考文献［3］方法检测T淋巴细胞增殖能力。取待测血清按ELISA试剂盒中的方法测定血清中IL-2含量。1.2.4实吋荧光定量PCR检测裸鼠

7、瘤组织p53基因mRNA的表达取1.2.2操作中得到的各组裸鼠瘤体组织按试剂盒说明书进行总RNA的提取、cDNA合成、及荧光定量PCR操作，以空白对照组裸鼠瘤组织p53基因mRNA表达水平为参照计算其他各组的P53基因mRNA表达水平变化。1.2.5统计随机分组由Eecel2003随机数发生器完成，计量数据用x-±s表示，用SPSS16.0统计软件，采用方差分析，组间比较采用t检验。2结果2.1对荷瘤裸鼠的体内抑瘤作用与荷瘤裸鼠对照组比较，翡翠贻贝多糖高中剂量组和5-FU组的宫颈癌瘤体生长均明显受到抑

8、制，差异有统计学意义(P<0.01),且翡翠贻W多糖高中剂量组间呈一定的剂量效应关系，结果见表1。表1各试验组荷瘤裸鼠瘤重和抑瘤率(x-±s,n=12)与空白对照组比较，*P<0.01；2.2对荷瘤裸鼠免疫功能的影响与荷瘤裸鼠对照组比较，翡翠贻贝多糖高中剂量组T淋巴细胞增殖能力和IL-2均升高，差异有统计学意义(P<0.01)