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1、低氧预适应对小鼠海马组织Fas-L表达的影响作者：姜树原高丽君张胜周立社邵国【摘要】目的:观察重复性低氧对小鼠海马组织内Fas-L蛋白质表达的影响。方法:小鼠低氧0次(H0)、1次(H1)、4次(H4)后取海马组织,应用WesternBlot技术,检测小鼠海马组织内Fas-L的蛋白表达变化。结果:实验发现H0、H1和H4组海马组织内Fas-L有表达，H4组与H0组之间没有差异，H1组显著升高（P<0.05，与H0和H1比较）。结论:急性低氧预适应使小鼠海马组织Fas-L表达改变。【关键词】低氧预适应;海马;Fa
2、s-LAbstractObjective：TodetecttheeffectofhypoxiapreconditioningonFas-Lexpressioninacuterepeatedhypoxicmicehippocampus.Methods：Miceweredividedinto3groupsrandomlyandwereexposedtohypoxiafor4runs(H4group)，1run(H1group)and0run(controlgroup),respectively.Westernwasuse
3、dtoexaminetheFas-Llevelinmicehippocampusafterexposuretohypoxia,withtotalproteinextractedfrommicehippocampusforWesternblot.Results：Fas-LwasfoundinH0,H1andH4group.Fas-Lproteinlevelswerefoundtobe8increasedinH1(P<0.05,vs.H4andH0).ThereisnodifferencebetweenH4andH
4、0.Conclusion：ThechangeofFas-Lproteinleveliscloselyrelatedtoprotectionofthebrainandtheformationofpreconditioninginhypoxicpreconditionedmice.KeywordsHypoxicpreconditioning;Hippocampus;Fas-L低氧/缺血是造成脑组织损伤的最常见的临床因素，严重影响人类的健康。脑虽然对低氧/缺血极为敏感，但神经细胞对低氧/缺血有一定的耐受性。1990年Kit
5、agawa等［1］发现脑组织存在低氧/缺血预适应现象，即脑经预先亚致死性的低氧/缺血暴露，可以增强脑对随后致死性低氧/缺血的耐受力。到目前为止其具体机制尚不十分清楚，但脑保护效果却很肯定。吕国蔚教授上世纪60年代发现小鼠经间断急性重复密闭低氧处理后，对低氧的耐受性随低氧的次数的增加而递增［2］。急性重复密闭低氧引起脑内众多物质发生变化，其中具有脑保护作用的一些物质发生上调，而具有脑损伤作用的物质发生下调［3］。Fas-L是调节细胞凋亡的重要分子，有“死亡分子”之称，但其在急性重复低氧预适应中的作用尚无报道。本工作研究
6、Fas-L表达在急性重复低氧小鼠海马中的变化，探讨急性重复低氧预适应形成脑保护过程中神经细胞凋亡的情况。8 1材料与方法 1.1动物模型复制 Balb/c近交系雄性小鼠，6～8周龄，体重18～22g，属清洁级动物，由军事医学科学院提供。按以前报道复制模型［3］,即将小鼠置于含有新鲜空气、经过标定的150mL广口瓶内,以橡皮塞密闭,记时。动物一旦出现喘呼吸（低氧耐受极限标志）,立即取出,转移到另一相同体积、含有新鲜空气的广口瓶内,密闭,记录低氧耐受时间,依此类推共进行4次低氧实验。实验分H0、H1、H4三组，H0
7、为正常对照组，H1为低氧1次组，H4为重复低氧4次组。随后立即断头取脑，剥离海马。 1.2WesternBlot 将海马置冻存管液氮冻存,然后移入裂解液中，用超声粉碎仪匀浆，用BCA法进行总蛋白定量，加入5×上样缓冲液，配制样品，100℃加热10min变性。从上述各组样品中分别取75μg的总蛋白上样，用8%SDS-PAGE、4℃、20mA电泳，当指示剂溴酚蓝电泳到分离胶时调节电流为30mA继续电泳3.5h；随后立即于4℃8、400mA条件下通过湿转法将蛋白从SDS-PAGE胶上转移到硝酸纤维素（NC）膜上，转膜5
8、h；将NC膜用TBS(10mmol/LTris-Cl,pH7.5,250mmol/LNaCl)振摇漂洗10min，10%脱脂牛奶封闭1h，再用TTBS(10mmol/LTris-Cl,pH7.5,250mmol/LNaCl,0.25%Tween-20)振摇洗膜3次，每次10min；NC膜与用TTBS稀释的Fas-L多克隆抗体（1∶500）或β－
