HOCO系统防治大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增殖的实验研究

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1、主要缩略词表Hemeoxygenase归O)血红素氧合酶Carbonmonoxide(CO)一氧化碳Vascularsmoothmusclecell(VSMC)血管平滑肌细胞AngiotensinII(Ang11)血管紧张素11RT-PCR逆转录聚合酶链式反应COHb碳氧血红蛋白Hemin(Hm)氯血红素ZincprotoporphyriIX(Znpp)原叶琳锌ELISA酶联免疫吸咐分析Phenylmethylsulfonylfluoride(PMSF)苯甲基磺酞氟SDS十二烷基磺酸钠Dithiothreitol(DT)二硫苏糖醇MTT四甲基偶氮哇蓝PDGF-1i血小板源性生长

2、因子碱性成纤维细胞生长因子内皮素胰岛素样生长因子Atherosclerosis(AS)动脉粥样硬化Restenosis(RS)再狭窄华中科技大学周济医学院博士学位论文HO-CO系统防治大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增殖的实验研究华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科博士研究生胡昌兴导师马业新教授中文摘要第一部分HO-CO系统对体外培养大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用目的研究HO-CO系统对血管紧张素II(AngII)诱导的体外培养大鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecell,VSMC，增殖的影响扣法体外培养Wistar大鼠主动脉VSMC，用AngII刺激诱导

3、其增殖，用血红素氧合酶-1(hemeoxygenase,HO-1)的诱导剂和阻断剂，以诱导和阻断HO-1的表达。酶联免疫法检测培养上清液中碳氧血红蛋白(COHb)含量，四哇氮(MT)比色法检测VSMCs增殖活力，逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白印迹杂交(Westernblot)分别检测HO-1mRNA和蛋白质的表达。结果Hm显著增加VSMCsHO-1mRNA及蛋白质的表达及培养上清液中COHb含量，同时VSMCs增殖活力被显著抑制冷论内源性CO显著抑制Ang11诱导的VSMCs增殖，HO-1mRNA及蛋白表达增加是内源性CO抗VSMCs增殖的分子生物学基础，提示HO-

4、CO信号系统在以VSMCs增殖为特征的心血管病的发生和发展中具有重要作用。关键词:血红素氧合酶;一氧化碳:平滑肌细胞;华中平斗生火大学同济医学院第二部分球囊损伤对大鼠颈动脉HO-1表达的影响目的观察球囊损伤对大鼠颈动脉HO-1表达的影响，以探讨HO-1在血管损伤反应过程中的意义。铸法通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及蛋白印迹杂交(Westernblotting)及免疫组化技术观察大鼠颈动脉球囊损伤后HO-tmRNA水平、蛋白质表达及其蛋白分布的动态变化。结果正常大鼠颈动脉仅见微量HO-1mRNA表达，球囊损伤后第1天HO-1mRNA表达达高峰，4,7和14天逐渐降低，H

5、O-1蛋白表达与HO-1mRNA表达基本一致，HO-1蛋白主要分布在血管乎滑肌细胞(VSMCS)胞浆中，并随新生内膜的,形形成和增厚，由中膜向增厚内膜中迁例结论球囊损伤可引起颈动脉HO-1表达增加，提示HO-1为血管自身抗损伤反应机制之一关。词:、球囊损伤:恤红素氧合酶1加动脉;大鼠第三部分HO-CO系统抑制大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的形成目的观察系统对大鼠颈动脉球囊损伤后内膜增殖的影响，为血管成形术后再狭窄的防治提供新思路。份法健康雄性Wistar大鼠40只(400-450g)，随机分为4组(n=10)eA组:正常对照组;B组:球囊损伤对照组;C组:氯血红素(HM)干预组:

6、D组:原叶琳锌(ZnPP)干预组。A组行假手术〔分离颈动脉，但不损伤内膜)，B,C,D组按文献方法制作颈动脉内膜损伤模型。所有大鼠给予正常饮食，B,C,D组于球囊损伤前3天至术后14天，分别给予生理盐水1MY只、Hm15m叭g.ZnPP40umoUkg隔日一次腹腔注射。球囊损伤后14天处死大鼠，分离颈动脉，行免疫组化及华中料技大学同济医学花电博t学位今仑JI,HE染色，观察颈动脉内膜增殖及HO-1蛋白分布;RT-PCR及Westernblotting分析颈动脉组织HO-1及蛋白质表达。结果A组颈动脉内膜无增厚，免疫组化示内膜无HO-1蛋白阳性表达颗粒;RT-PCR及Wester

7、nblotting提示颈动脉组织无HO-1mRNA及蛋白质表达;B组和D组颈动脉内膜明显增厚，免疫组化示B组增厚内膜中有少量HO-1蛋白阳性表达颗粒，D组增厚内膜中无明显HO-1蛋白阳性表达颗粒，RT-PCR及Westernblotting提示B组颈动脉组织有少量HO-ImRNA及蛋白表达;C组颈动脉内膜增厚明显减轻，内膜中有大量HO-1蛋白阳性表达颗粒，HO-1mRNA及蛋白表达量显著增高，与B组和D组比较有显著性差异(P<0.01)冷论HO-CO系统显著抑制颈动脉球囊损伤后新生内膜的形成