δ连环素在糖尿病大鼠海马神经元中的表达

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1、δ-连环素在糖尿病大鼠海马神经元中的表达【摘要】目的观察δ-连环素在大鼠糖尿病模型海马神经元中的表达特征。方法根据实验需要将大鼠随机分成糖尿病组、正常对照组和缓冲剂组。按45mg/kg一次性尾静脉注射链脲佐菌素(溶于0.1mol/L柠檬酸盐缓冲液)诱发糖尿病,缓冲剂组只给予等量的缓冲液。应用免疫组织化学方法观察海马神经元的形态结构变化，并应用计算机图像分析技术检测δ-连环素在各组中的定量表达。结果糖尿病组大鼠海马神经元中δ-连环素表达明显低于正常对照组和缓冲剂组，在海马齿状回减少尤为明显。结论糖尿病可下调大鼠海马神经元中δ-连环素的表达。【关键词】δ-连环

2、素;糖尿病;海马;大鼠;免疫组织化学　　Abstact：ObjectiveToinvestigatethecharacteristicsoftheexpressionofδ-cateninindiabeticrathippocampalneurons.MethodsTheratswererandomizedintodiabetic,normalcontrolandbuffergroups.Theratsinthediabeticgroupwereinjectedwithasingledoseof45mg·kgofSTZ(dissolvedin0.1mol/

3、Lsodiumcitratebuffer)viathecaudalveintoinducediabetesmellitus,andtheanimalsinthebuffergroupreceivedthesamedoseofsodiumcitratebufferalone.Themorphological8changesofthehippocampalneuronswereobservedbyimmunohistochemicalmethodandthequantitativeexpressionofδ-cateninineachgroupwasdeter

4、minedbycomputer-assistedimageanalysissystem.ResultImmunohistochemicalmethodandquantitativeassayrevealedthattheexpressionofδ-catenininthediabeticgroupwasthelowestinthethreegroups,particularlyinthedentategyrus(DG).ConclusionThediabeticfunctionaldisordersofthecentralnervoussystemmayd

5、ownregulatetheexpressionofδ-catenin.　　Keywords：δ-catenin;diabetes;hippocampus;rat;immunohistochemistry　　糖尿病神经病变是糖尿病常见的慢性并发症之一，可引起认知功能障碍及大脑的神经生理和结构改变[1-2]。海马是与脑高级功能相关的重要结构，在糖尿病患者中易受到损害，表现为更易发生中风、痴呆和认知减退[3]。　　δ-连环素属于P120-catenin蛋白家族，特异性地表达在神经元[4]。研究发现δ-连环素过表达能诱导细胞形成树突状突起，并增加原代海马细胞中树

6、突的形成[5]。已有报道δ8-连环素基因变异小鼠表现出严重的学习障碍、突触可塑性降低和突触成分的改变。糖尿病患者认知功能减退的机制至今不明，在糖尿病动物海马神经元中δ-连环素的表达变化也鲜有报道。　　1材料和方法　　1.1动物分组及模型制备SD雄性大鼠，体重260～300g，徐州医学院实验动物中心提供。随机分成正常对照组、缓冲剂组和糖尿病组(n=9)。按文献[6]方法，一次性尾静脉注射链脲佐菌素45mg/kg(溶于0.1mol/L柠檬酸盐缓冲液),缓冲剂组只给予等量的缓冲液。3天后测血糖，血糖>16.7mmol/L,饮水及尿量明显增多为造模成功。造模

7、成功后常规饲养60天，中间不进行胰岛素干预，也不进行糖尿病饮食控制，造模后每周监测血糖。每组取9只大鼠5%茂巴比妥钠腹腔注射麻醉，经心脏先灌注100ml的生理盐水后灌注4%多聚甲醛〔0.1mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)，pH7.3配制〕固定30min。动物静置于4℃冰箱3h后取大脑，用上述固定液后固定约6h(4℃)。并修取含海马脑段，经20%蔗糖-PBS液沉底后，-20℃恒冷切片机切片，片厚20μm。每个动物均依次等距离间隔选取切片,贴片。　　1.2血糖测定造模3天和取材前内眦静脉取血测血糖,血糖测定采用葡萄糖氧化酶法血糖试剂盒。　　1.3SABC法免疫

8、细胞化学反应切片经：①300mg/LH2O2208min;②4%牛