胰岛素受体在糖尿病大鼠心肌组织中的表达

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1、胰岛素受体在糖尿病大鼠心肌组织中的表达【摘要】目的通过研究胰岛素受体（insulinreceptor，IR）在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型中心肌组织中的表达，探讨IR与糖尿病性心肌病发病机制的关系。方法成年Sprague-Dam2及其光密度均为（66.58±6.32）较正常对照组减少（t分别=17.24、8.75，P均<0.05）。结论糖尿病心肌病可作为一种特异性的病变发展为心肌自主神经系统的紊乱和冠脉血流储备的障碍。IR表达阳性心肌细胞减少可能会造成心肌糖代谢的损害与心力衰竭的发生。【关键词】糖尿病心肌细胞胰岛素受体【Abstract】ObjectiveToinvestigat

2、etheexpressionofinsulinreceptor（IR）indiabeticmodelinducedbystreptozo-tocin.MethodsTaleSprague-Da.Indiabeticgroup，theratsalsmunohistochemistrymethod.Resultsparedyocardialcell，microvesseldissepimentthickeningandthedensitiesandnumbersofIRimmunostainingpositivemyocardialcellinleftventricleshoyopathya

3、ticnervousdisorderinmyocardiumandcoronaryarterybloodcurrentdisturbance.Thedoyocardiumindiabeticmodelmayrelatetopathologicchangesofdiabeticheartdisease，suchasmyocardialglyetabolismimpairmentandmyocardialfailure.【Keyyocardialcell;insulinreceptor1材料与方法1.1材料Sprague-DaQA2583-3364）、兔抗大鼠IR多克隆抗体（由中国武汉博士德

4、公司生产）、生物素标记的羊抗小鼠IgG及抗生物素蛋白—辣根过氧化物酶复合物（由中国武汉博士德公司生产）。采用UTHSCSAImageTools3.0（由美国德克萨斯大学医学院开发）图像分析处理系统进行分析。1.2方法1.2.1糖尿病模型的建立和分组Sprague-Damol/L枸橼酸钠缓冲液，剂量为3ml/kg。糖尿病组大鼠尾静脉注射1%链脲佐菌素枸橼酸钠缓冲液（pH4.6，0.1mmol/L），剂量为3ml/kg。48h后尾静脉取血，测定其空腹血糖及尿糖，将血糖高于16.7mmol/L，尿糖++以上的大鼠定为糖尿病模型。至此，糖尿病模型建立成功，以后每周测尿糖，每2周测血糖［4］。1.

5、2.2两组动物处死前以1%戊巴比妥钠（40mg/kg）麻醉，打开胸腔，经左心室向升主动脉内插管灌注0.9%氯化钠注射液及4%冷多聚甲醛固定液。取出心脏放入相同固定液内后固定4h，后浸入30%蔗糖溶液中置于4℃冰箱24h。用冰冻切片机切心脏横断面切片（厚18μm），然后贴附于涂有铬矾明胶的载玻片上。1.2.3免疫组织化学染色将冰冻切片以缓冲液PBS洗3次，3%H2O2孵育5min，PBS洗3次，每次5min，再经1%牛血清白蛋白孵育30min后，倾去血清放入第一抗体液（兔抗大鼠IR多克隆抗体1:200），玻片在湿盒内4℃孵育过夜，以PBS洗3次，每次5min。然后加入第二抗体液（生物素标记

6、的羊抗兔IgG1:200），置于室温2h，以PBS洗3次，每次5min。加入第三抗体液（抗生物素蛋白—辣根过氧化物酶复合物1:400）室温2h，以PBS洗3次，每次5min。以二甲基联苯胺（DAB）显色，显色3～7min，镜下标记物质呈棕黄色，后常规干燥、透明、树胶封片。正常组实验切片不加第一抗体孵育，其它步骤相同。1.2.4图像分析每只大鼠取1张相同部位DAB染色的心脏切片，进行IR测定。采用UTHSCSAImageTools3.0图像分析处理系统进行分析，统计各张切片单位面积内（mm2）阳性细胞的数量和光密度。1.2.5统计学方法采用SPSS10.0统计学软件。计量资料采用均数标准差

7、（±s）表示。与正常组大鼠比较，采用配对资料的t检验。设P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1血糖与尿糖糖尿病大鼠成模体重和血糖检测结果见表1。由表1可见，成模4周时，糖尿病组大鼠与正常组大鼠体重和空腹血糖的比较，差异有统计学意义（t=8.46、8.70，P<0.05）。2.2心肌组织的病理变化糖尿病组和正常组的心肌组织HE染色可见，与正常对照组相比，糖尿病大鼠心肌组织间质疏松，心肌细胞间间质较正常对照组增宽，心肌