糖尿病大鼠心肌组织中caspase8表达的研究论文

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1、糖尿病大鼠心肌组织中caspase8表达的研究论文【摘要】目的：研究糖尿病大鼠心肌组织中caspase8表达与糖尿病发病机制的研究。方法：按体重将大鼠随机分为正常对照组(10只)和实验组(40只),各组大鼠禁食12h后,实验组大鼠以60mg/kg的剂量一次性腹腔注射STZ溶液(0.1mol/L、pH=4.4的构橼酸盐缓冲液在冰浴下配制成11mg/ml的STZ溶液),正常对照组大鼠(NC)注射等体积的枸橼酸盐缓冲液，观察动物饮水、进食及尿量变化等情况。1周后,采尾血测血糖,以血糖浓度16.6mmol/L

2、,饮水量40ml/d,尿糖强阳性的大鼠作为糖尿病大鼠。6周后将各组大鼠处死,切取心室肌组织,进行免疫组织化学实验观察，将实验结果进行统计学分析。结果：正常对照组心肌细胞胞浆内无棕黄色颗粒沉积，Caspase8表达弱；糖尿病组心肌细胞胞浆内棕黄色颗粒密集，Caspase8呈阳性表达。图像分析结果显示：正常对照组心肌细胞内Caspase8表达的平均光密度及阳性面积率分别为0.1157±0.0067、0.1208±0.01966，糖尿病组心肌细胞内Caspase8表达的平均光密度及阳性面积率分别为0.3

3、738±0.0045、0.3450±0.0241。正常对照组与糖尿病组之间平均光密度及阳性面积率差异有显著性意义(P0.05)。【关键词】糖尿病；心肌；caspase8；免疫组化糖尿病(diabetesmellitus,DM)是一组由多种病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢性疾病群。作为一种常见病、多发病,其患病率正随人民生活水平的提高、人口老龄化、生活方式的改变而迅速增加,对人类健康有极大的威胁。DM发病逐年增多,.freelg/kg的剂量一次性腹腔注射链脲佐菌(streptozotocin,STZ)溶

4、液(用0.1mol/L、pH=4.4的构橼酸盐缓冲液在冰浴下配制成11mg/ml的STZ溶液),正常对照组大鼠(NC)注射等体积的枸橼酸盐缓冲液。观察动物饮水、进食及尿量变化等情况。1周后,采尾血测血糖,以血糖浓度16.6mmol/L,饮水量40ml/d,尿糖强阳性(+++～++++)的大鼠作为糖尿病大鼠。然后将各组大鼠处死,切取心室肌组织,进行免疫组织化学实验。实验期间,密切观察动物进食和饮水量变化,每周称2次体重。1.2.2主要试剂浓缩型兔抗鼠caspase8基因蛋白单克隆抗体盒(北京中山生物技术有

5、限公司)；超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒(北京中山生物技术有限公司)；显色试盒及多聚赖氨酸（北京中山生物技术有限公司）。1.2.3主要仪器YACH、FLICE、Mch5,1996年被克隆成功。caspase8基因CASP8与cFLIP(cellularFLICEinhibitoryprotein)基因及caspase10基因CASP10共同位于染色体2q3334。caspase8以无活性的酶原(procaspase8)形式存在于成人及除胎儿脑组织外的各种组织中,在外周血白细胞中分布较

6、高。在死亡受体(Fas、DR4和DR5等)介导的细胞凋亡途径中,caspase8是关键的启动型caspase。细胞外配体与细胞膜死亡受体(deathreceptor,DR)结合后,适配蛋白(如FADD)作为平台供procaspase8聚和并相互剪切。未活化时,procaspase8的两个DED结构是结合在一起的。当细胞膜表面的Fas与其配体(FasL)或相应的抗体结合后,受体发生多聚化,引起FADD与受体胞浆区死亡结构域结合,这种结合使FADD的DED变构,变构后的DED与胞浆中procaspase

7、8的一个DED结合,procaspase8的两个DED分开。procaspase8的ICE同源区暴露后表现出蛋白酶活性并通过自身催化形成有活性的caspase8。caspase是凋亡的主要执行者,caspase8的活化是caspase级联反应的第一步。caspase8与诸多疾病及损伤的病理变化有关。作为一个适宜的补充性检测指标,caspase8的免疫组织化学证据不仅可检测组织损伤而且可望成为生活反应早期阶段的评价指标。有学者通过研究caspase6、7在细胞凋亡过程中表达的时间规律性以探

8、讨推测皮肤损伤、愈合的时间［10］。caspase8在细胞凋亡过程中表达的时间规律性也有可能用以推测皮肤损伤、愈合的时间。为进一步研究糖尿病对心脏毒性的作用，我们对糖尿病性心肌病变进行了组织学及免疫组织化学的观察，结果显示，caspase8在正常对照组心肌细胞内呈阴性表达，而在糖尿病组中呈阳性表达。结果提示高血糖可直接导致活体心肌细胞凋亡,高血糖导致的心肌细胞凋亡至少部分是通过细胞色素C激活的caspase3途径的激活而