医学毕业论文糖尿病大鼠心肌组织中caspase8表达的研究

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1、糖尿病大鼠心肌组织中caspase8表达的研宄姓名：2014年6月25日糖尿病大鼠心肌组织中caspase8表达的研究【摘要】H的：研宄糖尿病大鼠心肌组织中caspase8表达与糖尿病发病机制的研％。方法：按体重将大鼠随机分为正常对照组(10只)和实验组(40只)，各组大鼠禁食12h后，实验组人鼠以60mg/kg的剂量一次性腹腔注射STZ溶液(0.1mol/L、pH=4.4的构橼酸盐缓冲液在冰浴下配制成1lmg/ml的STZ溶液)，正常对照组大鼠(NC)注射等体积的枸橼酸盐缓冲液，观察动物饮水、进食及尿量变化等情况。1周

2、后，采尾血测血糖，以血糖浓度16.6mmol/L，饮水量40ml/d，尿糖强阳性的大鼠作为糖尿病大鼠。6周后将各组大鼠处死，切取心室肌组织，进行免疫组织化学实验观察，将实验结果进行统计学分析。结果：正常对照组心肌细胞胞浆内无棕黄色颗粒沉积，Caspase8表达弱；糖尿病组心肌细胞胞浆内棕黄色颗粒密集，Caspase8呈阳性表达。图像分析结果显示：正常对照组心肌细胞内Caspase8表达的平均光密度及阳性面积率分别为0.1157±0.0067,0.1208±0.01966,糖尿病组心肌细胞内Caspase8表达的平均光密度

3、及阳性而积率分别为0.3738±0.0045>0.3450±0.0241。正常对照组与糖尿病组之间平均光密度及阳性面积率差异有显著性意义(P0.05)。【关键词】糖尿病；心肌；caspase8;免疫组化糖尿病(diabetesmellitus，DM)是一组由多种病因引起的以慢性高血糖为特征的代谢性疾病群。作为一种常见病、多发病，其患病率正随人民生活水平的提高、人口老龄化、生活方式的改变而迅速增加，对人类健康有极大的威胁。DM发病逐年增多，已成为世界上继肿瘤、心血管病后第3位严重的慢性病［1］，因而早期发现、單期确诊、早期

4、治疗是决定糖尿病患荠治疗效果及能否达到临床治愈的关键。本研宄采用免疫组织化学方法观察Y高血糖引起的心肌细胞的凋亡作用，旨在探讨和寻找治疗糖尿病和保护心肌的实验依据。1材料与方法1.1材料昆明种SD大鼠30只，雄性，体重180〜200g，由武汉大学医学院实验动物中心提供，适应饲养1周后进行实验。1.2方法1.2.1动物模型建立及分组按体重随机分为正常对照组（10只）和糖尿病组（20只），各组大鼠禁食12h后，实验组大鼠以60mg/kg的剂量一次性腹腔注射链脲佐菌（streptozotocin，STZ）溶液（用0.1mol/

5、L.pH=4.4的构橼酸盐缓冲液在冰浴下配制成llmg/ml的STZ溶液），正常对照组大鼠（NC）注射等体积的枸橼酸盐缓冲液。观察动物饮水、进食及尿量变化等情况。1周后，采尾血测血糖，以血糖浓度16.6mmol/L，饮水量40ml/d，尿糖强阳性（+++〜++++）的大鼠作为糖尿病大鼠。然后将各组大鼠处死，切取心室肌组织，进行免疫组织化学实验。实验期间，密切观察动物进食和饮水量变化，每周称2次体重。1.2.2主要试剂浓缩型兔抗鼠caspase8基因蛋白单克隆抗体盒（北京中山生物技术有限公司）；超敏即用型SP通用型免疫组织

6、化学试剂盒（北京中山生物技术有限公司）；显色试盒及多聚赖氨酸（北京中山生物技术有限公司）。1.2.3主要仪器YWY781型医用微波仪（250W,50Hz）,浙江临安电子器材厂生产；家用高压锅。1.2.4常规HE染色以上各组动物实验完毕后，将各组动物从心底部剪取心脏，切下心室。4%多聚甲醛固定、包埋、石蜡切片、HE染色。1.2.5免疫组织化学SP法检测caspase8相关抗原主要步骤：①组织切片5Hm，常规脱蜡至水，蒸馏水洗；②3%过氧化氢，37°C孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，PBS洗4><5min;③cas

7、pase8采用微波抗原修复（3档，10min）,PBS洗4x5min；④正常羊血清37°C孵育10min以减少非特异性反应；⑤一抗（Bel2,k150）37°C孵育1h,PBS洗4><5min;⑥生物素标记的二抗，37°C孵育lOmin，PBS洗4><5min;⑦链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物37°C孵育lOmin,PBS洗4><5min;⑧DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应；⑨苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作为阴性对照。1.2.6免疫组织化学结果判断caspase8以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应

8、。阴性对照除细胞核染成蓝色外，胞浆内无棕黄色反应物。采用HPIAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统（同济千屏影像公司）对caspase8表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野（x400），测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所奋细胞总面积，计算阳性面积率。以每例5个视野的