RNA结合蛋白Sam68mRNA在原发性肝癌中的表达及意义

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1、RNA结合蛋白Sam68mRNA在原发性肝癌中的表达及意义作者：马高祥傅利锋王涌吴育连【摘要】目的探讨RNA结合蛋白Sam68mRNA在人原发性肝癌组织中的表达及意义。方法选取20例原发性肝癌的肿瘤组织及相应癌旁组织，采用TRIzol一步法提取总RNA，采用RT-PCR法检测Sam68mRNA在肝癌组织及相应癌旁组织中的表达。结果PCR产物电泳显示肝癌组织中Sam68mRNA平均表达强度为60.71％±9.26％，相应癌旁组织中Sam68mRNA平均表达强度为76.98％±11.61％，经配对t检验，P＜0.05，具

2、有统计学差异。结论与相应癌旁组织相比，人原发性肝癌组织中Sam68mRNA的表达明显降低，提示在人原发性肝癌组织中Sam68的表达在转录水平受到明显抑制。【关键词】肝癌RNA结合蛋白聚合酶链反应　　【Abstract】ObjectiveTodiscusstheexpressionofsam68inprimaryheptocarcinomaantitssignificance..Methods20casesoftumortissuesandcorrespondingnear-tumortissuesofhumanpri

3、maryhepatocellularcarcinomawerecollected.TotalRNAwasextractedfromspecimensusingTRIzolone-stepmethod,8theexpressionlevelofsam68inbothoftumortissuesandcorrespondingnear-tumortissueswereobservedwithreversetranctiption-polymerasechainreaction(RT-PCR).ResultsExamine

4、dbyultravioletspectrophotometer,themeanexpressionlevelofsam68was60.71％±9.26％intumortissues,and76.98％±11.61％innear-tumortissues.Bymatchdatatest,P＜0.05,indicatedthedifferencehadstatisticsignificance.ConclusionComparingtorespondingnear-tumortissues,theamountsofsam

5、68mRNAexpressionwerelowerinhumanprimaryhepatocellularcarcinoma.ItshowsthattheexpressionofRNA-bindingproteinsam68isinhibitedattranscriptionlevelinhumanhepatocellularcarcinoma.　　【Keyword】hepatocellularcarcinomaRNA-bindingproteinpolymerasechainreaction(PCR)　　Sam68

6、是STAR蛋白家族的代表成员之一,目前关于Sam68的报道仅限于国外研究，且大多以序列结构分析及相关配体检测为主，而Sam68与各种恶性肿瘤的相关性研究较少，在原发性肝癌中的表达情况国内外少见正式报道。本研究通过半定量RT-PCR技术，首次明确了RNA结合蛋白Sam688mRNA在人原发性肝癌中的表达情况，为进一步研究STAR蛋白在肿瘤形成和发展过程中的作用机制提供了一定的理论基础。　　1材料和方法　　1.1材料　　20例原发性肝癌的肿瘤组织及相应癌旁组织取自浙江大学医学院附属二院病理科新鲜冰冻标本,主要试剂TRIZ

7、OL（Invitrogen公司）MMLV（逆转录酶）和TaqDNApolymerase（Promega公司）dNTP（上海博亚生物技术公司），DEPC（GIBCO公司）Agarose（AMRESCO公司）DNAMarkerDIL2000（Takara公司）乙醇、氯仿、异丙醇、溴化乙锭及其他试剂均为国产或进口纯试剂。　　1.2方法　　(1)细胞总RNA提取（RNAextraction）取20例原发性肝癌的肿瘤组织及相应癌旁组织分成20对样本，碾磨成粉,采用TRIzol一步法提取总RNA。(2)RNA质量检测取RNA2μ

8、l，加98μlDEPC水，混匀，紫外分光光度仪比色测OD值，计算A260/280比值，以及所抽提的总RNA浓度(3)RT-PCR法检测Sam68的表达参照国外文献［１］设计Sam68及β8-actin引物各一对，(引物序列见表1，由上海生工生物技术工程服务有限公司合成。)PCR扩增产物片段分别为Sam68530bp，β-actin300bp。取