多重置换扩增MDA结合多重PCRY染色体微缺失检测方法的探究

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1、分类号：R698+．2密级：学位类别：科学学位口专业学位团◎学校代码：10062学号：2010602747学科门类：医学又坪鲁斜袁号硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：多重置换扩增(MDA)结合多重PCR—Y染色体微缺失检测方法的探究TITLEExplorationthemethodofYchromosomemicrodeletiondetectionbyMultipledisplacementamplification(MDA)andmultiplePCR一级学科：临床医学二级学科：妇产科学论文作者：卓胜楠指导教师：张云山教

2、授天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明fIIIIIllIIIIIIIIIIIIIIIIIllIY2396295本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：j脚日期：>of哆年-月夕≥日I学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分

3、内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密区可。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：j蛳日期：为乃年}月哆日导师签名：—渺日期：yr≥年}月瑚天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：第一部分：通过对男性原发不育患者Y染色体微缺失的分析研究，探讨Y染色体微缺失的临床意义，为临床进行男性不育的诊断、治疗以及辅助生殖技术提供相应的理论依据。第二部分：回顾性分析Y染色体微缺失患者行ICSI—ET治疗的

4、胚胎受精率、卵裂率、优胚率、妊娠率及早期流产率等指标，初步探讨Y染色体微缺失是否影响ICSI治疗结局。第三部分：通过多重置换扩增(MDA)联合聚合酶链式反应(PCR)建立单细胞AZF检测方法，为临床Y染色体微缺失患者植入前胚胎行AZF检测提供新的方法，为患者合理选择移植胚胎和更确切的遗传学咨询提供依据。方法：第一部分：以2012年1月"---2012年10月于天津市中心妇产科医院生殖中心就诊的男性原发无精子症、严重少弱精子症和少精子症患者122例为研究对象。所有患者均按照世界卫生组织(WH0)推荐的方法和诊断标准加以确诊，排除内分泌失调及输精管阻塞等因

5、素。留取上述患者外周血2mL，乙二胺四乙酸盐(EDTA)抗凝，标本在检测前置．20℃冰箱保存。选取30例已正常生育的健康男性为对照。采用盐析法提取DNA，选取15个位点进行Y染色体微缺失检测，包括AZFa区的sY82、sY84、sY86，AZFb区的sY124、sYl27、sYl28、sYl33、sYl34、sYl43，AZFc区的sY239、sY242、sY254、sY255，AZFd区的sYl45、sYl52。将这15个位点组成4套多重PCR系统，分别为系统I：SRY、sY254、sY143、sY242、sY255，系统II：SRY、sY84、sY

6、239、sY152，系统III：SRY、sY86、sY127、sY145、sY124，系统IV：SRY、sY134、sY82、sY128、sY133。每套系统中以SRY基因作为内对照，同时以空白和已正常生育的男性作外对照。第二部分：回顾性分析5例Y染色体微缺失患者的6个ICSI周期和同期治疗的无Y染色体微缺失的严重少弱精子症或无精子症患者的胚胎情况，共57例62个ICSI周期，所有患者精液分析均按WHO标准，连续2次精液分析并经离心沉淀均无精子者为无精子症，精子浓度<5×106／ml者为严重少精子症。所有患者均排除染色体核型异常且行Y染色体微缺失检测。

7、观察分析两组间患者的受精率、卵裂率、优质胚胎率、胚胎着床率、生化妊娠率、临床妊娠率和早期流产率。第三部分：选取天津市中心妇产科医院生殖中心行体外受精天津医科大学硕士学位论文．胚胎移植(IVF．ET)治疗的86例男性原发不育患者为研究对象，提取外周血DNA及单淋巴细胞，采用MDA方法对单／两个淋巴细胞进行全基因组扩增，扩增成功的单淋巴细胞行性别鉴定(采用DYZl／DXZl引物，引物序列如下：DYZl：5’一TCCACTTTATTCCAGGCCTGTCC-3’．5’一TTGAATGGAATGGGAACGAATGG．3’DXZl：5’．AATGTGCAAGT

8、GGCTATTTAGCG．3’5'-TCCATCATAAGGAATGTTCAGCT_3’)，最