多重定量pcr结合荧光片段分析检测缺失型α-地中海贫血的方法建立及其应用

《多重定量pcr结合荧光片段分析检测缺失型α-地中海贫血的方法建立及其应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、重庆医科大学硕士学位论文多重定量PCR结合荧光片段分析检测缺失型α--地中海贫血的方法建立及其应用姓名：莫宗平申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：冯文莉；胡朝晖201205重庆医科大学硕士研究生学位论文多重定量PCR结合荧光片段分析检测缺失型伐．地中海贫血的方法建立及其应用摘要目的：0【．地中海贫血(alpha．thalasseIIlia)是一种常见的常染色体隐性遗传病，该病的发生主要由编码0【珠蛋白的0【基因(0【1和。【2)缺失引起。而目前对于该疾病的诊断主要依赖于基因分析，但常用的多重Gap．PCR检测方法通常仅限于几种常见的缺失型0【．地贫基因，对

2、于部分罕见及未知的缺失型0【．地贫基因无从检测。本研究旨在建立一种能同时检测常见与罕见甚至未知缺失型Oc一地中海贫血的多重PCR结合荧光片段分析(QuantitativeMultiplexPcRofshortFluorescentFragmentsAnalysis，QMPsF)方法，并探讨该方法用于检测缺失型0【．地贫基因的可行性。方法：1．根据荧光片段分析技术原理，选取50例无0【基因缺失的健康对照者、50例O【基因杂合缺失的O【一地贫患者、50例仅基因纯合缺失的0【．地贫患者基因组DNA，建立应用多重定量PCR结合荧光片段分析的检测0【一基因缺失的方法，0【基因的

3、拷贝数(心)通过样本内与样本间的两次标准化计算而获得。2．应用建立的QMPsF方法检测579例广东和广西籍患者样本，同时利用多重Gap．PCR(检测中国人群中常见的一8EA、一0【3·7与一0【4’2地贫基因)进行平行检测。比较两方法结果，结果不吻合者进一步通过多2重庆医科大学硕士研究生学位论文重连接酶依赖的探针扩增技术(MLPA)以及后续的实验检测。结果：1．所建立的方法能准确的检测缺失型0【一地贫基因，各类样本的0【基因(包括Ⅸ1和0【2)拷贝数(心)均值(SD，区间)分别为：阴性对照1．oo(O．14，O．77．1．31)；仅1或仅2基因杂合缺失者为O．60(O

4、．07，0．40．O．75)；仅1或仅2基因纯合缺失者为0．oo(O．oo，OO．0．O．OO)。／2．QMPsF与多重Gap．PCR对579例样本进行平行检测结果显示：：572例样本结果吻合，7例样本结果不符合。这7例样本最终通过MLPA及后续实验证明由1例罕见缺失型一T心／．cc3‘’，1例新缺失型一s队／-O【28，4例Ⅸ0【0【8㈣3一，1例晓O【0【8川4·2组成。对于此7例样本应用建立的方法检测结果与MLPA结果一致。结论：本文所建立的多重PcR结合荧光片段分析方法应用于0【一珠蛋白基因的缺失检测，是一种准确性高、重复性好的方法，能用于常见与罕见甚至未知缺

5、失型伐一地贫基因以及c【一珠蛋白基因重复突变的检测，它能提高地中海贫血携带者的检出率，可作为目前针对仅．地贫的基因检测仅限于几种常见缺失型现状的很好补充。关键词：O【．地中海贫血，荧光片段，基因缺失，多重定量PCR重庆医科大学硕士研究生学位论文DEVELOPMENTANDAPPLICATIoNoFQUANTITALTIVEMUIJIPLEXPCRoFSHoRTFLUoRESCENTFRAGMENTMETHoDFoRDETECTINGoFALPHA．GLOBINGENEDELETIONSINALPHA．THALASSEMIAABSTRACTObjectiVe：仅-Tha

6、lassemiaisoneofthemostcommonautosomalrecessiVeinheriteddiseases．Themaincauseofthisdiseaseinvolvsethedeletionofthe0【。globinencodinggenes(O【1and以)．Thedia印osismainlyreliesongeneticanalysis．Commonmethods1ikemultiplexgap．PCRarelimitedtothemostcommon够pesofdeletions．Forinvestigatillgraureandun

7、charactenzedla略edeletions，anewmethodisurgentlyneeded．Inthisstudy，weestablishedasensitiVemethodofmultipleXPCRforshortnuorescent行agmentthatcandetectnot011lymepresenceofthecommondeletions，butalsotheunusualorunknown仅一globingenedeletionsof0c‘thalassemia．WealsoinVestigateditsapplicat