假黄色单胞菌Pseudoxanthomonasjaponensis防治南方根结线虫的研究

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1、M．S．DISSERTATIONBiologicalcontrolofMeloidogynincognitabyPseudoxanthomonasjaponensisByLiJingDirectedbyAssoc．Prof．LiuYa．JunYunnanUniversity，Kunming，P．R．ChinaJune．2013资助项目国家自然科学基金(线虫生防真菌Pochoniach]amydosporia与根际细菌协同增效机制，31260446，主持人：刘亚君)May2013独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，

2、论文中不包含其他人或集体已经发表或撰写过的研究成果，对本文的研究做出贡献的集体和个人均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：论文使用和授权说明本人完全了解云南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文和论文电子版；允许论文被查阅或借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。(保密的论文在解密后应遵循此规定)研究生签名：导师签名：日期：猃!至：』本人及导师同意将学位论文提交至清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”进行电子和网络出版，并编入CNKI系列数据库，传播本学位论文的全部或部分内容，同意按《中

3、国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。研究生签名。’?；!师签名：～⋯一日期：云南大学硕士学位论文摘要植物寄生线虫给农业和林业生产造成巨大经济损失，利用根际细菌对有害线虫进行生物防治已经被广泛应用。本文研究内容主要是从云南省和山东省的4个采样地25份线虫发病土壤样品分离到的116株细菌中，筛选出一株具有较强杀线虫活性的根际细菌ZKB．24-4。并对该菌株进行了菌种鉴定、杀线虫活性成分纯化分离，以及温室和田间小区防治南方根结线虫(Meloidogynincognita)的初步实验，具体结果如下：1．从分离到的116株细菌中，分别以秀丽隐杆线虫(Caenorhaditisele

4、gansl为靶标，以NB为液体培养基，筛选出89株12小时对线虫致死率为80％以上的细菌，经过复筛得到95株24小时对线虫致死率为90％以上且活性稳定的菌株。另外将116株细菌分别涂布于NGM固体平板，以秀丽隐杆线虫为靶标再次进行筛选，得到7株在60小时致死率达到90％以上的稳定杀线虫作用细菌。两者筛选结果综合对比后，再以南方根结线虫(Meloidogynincognita)为靶标，分别以NB液体培养基和NGM固体平板两种培养方式测试杀线虫活性。筛选出根际细菌ZKB．24-4在两种培养条件下都具有稳定的杀线虫活性，该菌在NB培养条件下6小时杀线虫活性为98％，在NGM固体平板中36小时对线虫致

5、死率大于50％。2．对前期筛选得到的细菌ZKB．24-4进行分子生物学鉴定。经过16SrDNA序列比对分析，其16SrDNA序列与假黄色单胞菌(Pseudoxanthomonas]aponensis)的16SrDNA序列相似度为100％；另外根据形态学观察，革兰氏染色均表明ZKB．24-4与假黄色单胞菌相符，所以该细菌最终鉴定为PseudoxanthomonasjaponensisZKB-24-4。3．扩大发酵细菌ZKB．24-4，该细菌发酵液正丁醇萃取相具有明显活性，从中活性跟踪分离纯化得到13个化合物，鉴定出9个化合物，其中有两个新化合物。以南方根结线虫(Meloidogynincogni

6、ta)为靶标分别对以上10个化合物进行了杀线虫活性测定。其中化合物H显示出较强杀线虫活性，其半致死率浓度为447．6ppm。化合物C、Q也表现出一定的杀线虫活性。4．利用菌株ZKB．24-4进行了根结线虫病的温室盆栽试验和田间小区试验。在盆栽试验中，以每盆施药150ml发酵液防治效果最好，初期防治效果要比后云南大学硕士学位论文期好。ZKB．24-4以150ml每盆施药30天时防治效果为55．6％，60天时防治效果为52．1％。田间试验主要在弥勒县和江川县进行，单纯使用ZKB．24-4时防治效果均可达到20％，同期化学药剂阳性对照防效为23％。将其与与实验室之前开发的根结线虫生防真菌混合使用后防

7、治效果均有提高，分别达到29．5％和30．1％，防效提高了30．50％。论文的创新点：1．首次报道了Pseudoxanthomonasjaponensis具有防治根据线虫的作用。在盆栽试验中防治效果可以达到52．1％，田间试验中防治效果稳定在20％与阳性对照相当。2．分析了假黄色单胞茵(Pseudoxanthomonasjaponensis)主要以代谢产物作用于线虫，并分离鉴定了9个化合物。关键词