南方根结线虫被穿刺巴斯德芽菌感染初期的转录组分析

《南方根结线虫被穿刺巴斯德芽菌感染初期的转录组分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、s/0(h大營硕士学位论文题目：龍■補■通純作者：鲁越指导教师：鲍时翔研究员专业：生物化学与分子生物学时间：二〇一五年五月TheTranscriptomeAnalysisoffiarly-infeetedMeloidogyneIncognitabyPasteuriaPenetransAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinAgronomyByLuYanSupervisor:?Major:BiochemistryandMolecularBiologySub

2、mittedtime:May,2015海南大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期年左月日学位论文嵌权使用授权说明本人完全了解海南大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权海南大学可以

3、将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本人在导师指导下完成的论文成果，知识产权归属海南大学。保密论文在解密后遵守此规定。论文作者签名：§导师签名：日期：圳舞々月日日期乂年本人已经认真阅读高校学位论文全文数据库发布章程”’同意将本人的学位论文提交“高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中规定享受相关权益。意啦提交發滞品□轉：年：□二论文作者签名：导师签名：曰期：！月曰曰期；月，；；曰摘要根结线虫是一类分布广泛的植物寄生线虫，主要包括南方根结线虫、花生根结线虫、北方根结线虫以及爪

4、哇根结线虫这四类，对农作物的危害非常严重。在我国分布最广危害最大的是南方根结线虫。穿刺巴斯德芽菌是植物根结线虫的一种专性寄生菌，它能够专性吸附在根结线虫的表面进入线虫体内生长发育，产生的大量菌体夺取线虫的营养，导致根结线虫营养不良、发育异常从而降低线虫的虫口密度。它是目前公认的防治根结线虫病的有效生防菌。本论文在植物体外用穿刺巴斯德芽菌的孢子吸附南方根结线虫的二龄幼虫。观察南方根结线虫的死亡率情况以及吸附初期根结线虫的转录组变化。探讨穿刺巴斯德芽菌感染南方根结线虫初期对线虫基因表达的影响。首先我们用单卵块纯化法纯化从野外采集的根结线虫，经过分子生物学方法鉴

5、定，确认纯化的根结线虫为南方根结线虫。接着在植物体外用穿刺巴斯德芽菌的孢子吸附南方根结线虫的二龄幼虫，观察线虫的死亡率变化。并在感染穿刺巴斯德芽菌的第三天提取南方根结线虫的总进行转录组测序，比较差异表达的基因以及相关的调控通路，并从上调和下调的基因中各随机挑取个基因进行实时荧光定量，验证转录组测序结果。结果发现感染穿刺巴斯德芽菌后南方根结线虫的存活率降低。转录组测序结果表明，吸附了穿剌巴斯德芽菌的根结线虫与对照组相比总共有个基因发生变化，其中有个基因表达上调，有个基因表达下调。通过数据库的分析和比对发现上调的差异表达基因显著富集在不饱和脂肪酸生物合成这条信

6、号通路上，下调的差异表达基因显著富集在异源物质代谢的细胞色素代谢通路上。实时荧光定量验证结果与转录组测序的结果一致。穿刺巴斯德芽菌吸附南方根结线虫后能够降低线虫的存活率。转录组测序蹄选出的上调的差异表达基因主要富集在不饱和脂肪酸生物合成代谢途径上，这条代谢途径的激活能提高线虫的先天免疫功能，有助于增强南方根结线虫抵抗穿剌巴斯德芽菌的侵染。然而下调的差异表达基因显著富集在异源物质代谢的细胞色素代谢途径上，这提示我们穿刺巴斯德芽菌为了实现对线虫的有效侵袭和共生的目的，可能在侵染的初期通过降低根结线虫异源物质代谢的细胞色素代谢通路上基因的表达，来抑制和干扰根结线

7、虫的解毒和先天免疫机制。关键词：南方根结线虫；穿刺巴斯德芽菌；存活率；转录组测序南方根结线虫被穿刺巴斯德芽菌感染初期的转录组分析，，，海南大学硕士学位论文，，：海南大学硕士学位论文目录前言根结线虫的研究概况根结线虫及其危害根结线虫的防治穿刺巴斯德芽菌的研究进展穿刺巴斯德芽菌穿剌巴斯德芽菌与根结线虫防治转录组测序技术转录组测序的基本原理转录组测序的基本步骤转录组测序的主要用途转录组测序技术的意义本研究的目的和意义材料和方法实验材料主要药品和试剂主要仪器和设备本研究所用引物实验方法穿刺巴斯德芽菌的收集：植物材料的准备和样品采集根结线虫的纯化和扩大培养南方根结线

8、虫的鉴定穿刺巴斯德芽菌吸附南方根结线虫二龄幼虫根结线虫总的提取根结