转化生长因子β1表达与矽肺肺纤维化关系的研究

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1、娜全拿世耸丈转化生长因不pi表达与矽肺肺纤维化关系的研究博士研究生指导教师摘要石英所引起的肺纤维化是一个复杂的反应，机理尚未完全阐明。TGF-p，是近年来发现的肺纤维化过程中一个非常重要的细胞因子，Smads家族是细胞质内TGF-p的信号转导分子，可将TGF-p的信号直接由细胞膜转导入细胞核内。最近的研究表明，Smads家族在纤维化的发生发展中有重要作用。关于TGF-伪、Smads与纤维化的关系，国内外虽然已经在肝纤维化、博莱霉素引起的肺纤维化以及其他器官纤维化中进行了一些研究，但是它们表达水平变化与矽肺肺纤维化的关系尚不明确。因此本文从体

2、外实验~动物实验一人群调查三个层次研究二者的关系，主要包括以下几个方面:首先在体外实验观察石英与TGF-P。蛋白和基因表达水平之间的剂I一效应和时间一效应关系:然后建立矽肺动物模型，检测染石英小鼠中TGF-肠和Smads的表达，进一步明确其在矽肺肺纤维化及早期诊断中的意义;在上述基础上，进行人群调查，初步探讨TGF书，是否可作为矽肺早期诊断的生物标志物;最后以TGF-p。为指标探讨了牛磺酸和烟酸对石英致肺纤维化的干预作用。俪将结果报告如下:第一部分染石英肺泡巨噬细胞中转化生长因予p:的表达目的观察石英与小鼠肺泡巨噬细胞(AM)TGF书:表达

3、水平之间的剂量·效应关系和时间一效应关系，从而探讨TGF-氏在石英引起肺纤维化中的作用.方法以不同剂It石英及不同作用时间刺傲小鼠AM，收集其培养上清液，并作用于小鼠胚肺成纤维细胞，用ELISA法测定AM上清液TGF-肠蛋白水平，WestemBlot方法检测AM内TGF-p:蛋白水平，RT-PCR方法侧定AM内TGF-p:基因表达的变化，四哇盐(MTT)比色法侧定成纤维细胞增殖效应(Aswo.)e珍中澎丈笋闻跻曹笋娜士笋世igl丈结果小鼠AM经不同剂量石英刺激4h后，结果显示随着石英剂量增加细胞培养上清TGF-(i1蛋白水平逐渐升高，剂量1

4、00u留10‘细胞时，与空白对照组比较差异有显著性(P<0.05).同剂量的石英作用不同时间后，TGF-肠蛋白随时间延长呈现先升高而后逐渐降低的趋势，染石英8h时，其水平最高(276.6士38.lpg/ml),然后开始下降，但到第16h仍高于对照组.AM内TGF-01蛋白的表达有随石英剂f增高而上升的趋势，且随作用时间延长也呈先升高后降低，但其表达高峰时间在4h，较上清中出现的早.TGF-p:基因表达在较低剂It石英刺激后可明显升高，有随剂f增加而上升的趋势，与蛋白的变化基本一致，就时间效应关系而言，各时间点之间虽然有先升高后降低的趋势，但

5、差异无显著性.石英剂10-200v以106细胞范围内，AM上清液作用于小鼠胚肺成纤维细胞，可引起细胞增殖，从10011g/10‘细胞开始差异有显著性，并存在剂f效应关系.AM上清TGF-p，蛋白水平与A570.进行相关分析，两者呈正相关，即TGF-p，水平越高，则成纤维细胞增殖越强(r=0.76,P<0.05)0结论石英体外刺激小鼠AM，引起TGF-01蛋白和基因表达水平升高，且呈现剂蚤一效应关系和时间一效应关系。经石英刺激后的AM上清液可导致小鼠胚肺成纤维细胞增殖，有明显剂It一效应关系，AM上清TGF-01越高，促增殖能力越强，二者呈正

6、相关.这说明TGF-01与石英引起的肺纤维化有明确的联系，它可能是矽肺发生发展一个重要因素。第二部分染石英小鼠TGF-p1"Smads和胶原代谢的变化一、TGF-p:在染石英小民中的表达目的观察染石英小鼠肺组织TGF-伪蛋白和基因的表达，血清和支气管肺泡灌洗液TGF-R1蛋白水平，研究其在矽肺肺纤维化及早期诊断中的意义。方法采用基露式气管内注入法，对小鼠一次性染石英(0.28/k8体重)01,3,5,7,14,28d分批取样，免疫组织化学技术检测TGF-氏蛋白表达，用RT-PCR方法测定肺组织TGF-01基因的表达，ELISA法测定血清和支

7、气管肺泡灌洗液中TGF-01蛋白水平.结果石英组小鼠肺组织中TGF-伪蛋白表达明显增强(对照组见少量弱表达)，于7-14d表达强度更高.石英组出现TGF-p:蛋白表达阳性AM，第5d达到高峰(阳性率93.40112.08%,P<0.05).图像定I分析表明，小鼠肺组织TGF-01蛋白表达在第3.5.华呐弃左丈笋间并丢笋薄t尹世论戈7,14d与对照组比较均有显著性差异(各时间点间无明显差异)且于第7d表达水平达最高(40.2士2.0，阳性单位PU)o染石英第3d小鼠肺组织中TGF-几基因表达开始升高(1.2010.15，比值)，第7d达到高峰

8、(1.7410.19)，后开始下降，但直到第28d仍高于正常.血清中TGF-0;蛋白水平，从染石英第5d开始明显高于对照组(107.5士9.9vs100.7士4.3pg/ml,P