鸡内金淀粉酶理化特性研究

《鸡内金淀粉酶理化特性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、鸡内金淀粉酶理化特性研究作者：孙颖,刘同祥,胡舒,李梦,张宗申【摘要】目的寻找鸡内金淀粉酶的最佳炮制工艺和理化性质。方法50℃烘干后,用磷酸缓冲液提取鸡内金淀粉酶,分别在不同温度、pH值、不同金属离子处理下测定酶活力,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果鸡内金淀粉酶的最适反应pH、最适反应温度和最适底物浓度分别为8.67、50℃和1.8g/mL；实验条件下,以淀粉为底物的Km是0.92；Ca2+、Fe2+、Zn2+、Mn2+等金属离子对淀粉酶活性有抑制作用；聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条谱带,表明鸡内金中可能无淀粉酶同工酶存在。结论鸡内金炮制加工过程中要注意金属离子的影响。【关键词】鸡内

2、金；淀粉酶；理化性质；同工酶Abstract：ObjectiveTosearchfortheoptimalprocessingprocedureandphysico-chemicalpropertiesofEndotheliumcorneumamylase.MethodsAfterdriedunder50℃,amylasewasextractedfromEndotheliumcorneumwithphosphate-bufferedsaline.Theamylaseactivitywasexaminedatdifferenttemperature,pHanddifferent

3、metalions,andamylaseisozymewasdiscernedonPAGE.ResultsTheoptimalpH,optimaltemperature,andoptimalsubstrateconcentrationforamylase9activitywere8.67,50℃and1.8g/mL,respectively.Undertheexperimentalconditions,theamylaseKmwas0.92(starchwasusedassubstrateofamylase).Fourmetalionstested,includingCa2+

4、,Fe2+,Zn2+,Mn2+,couldinhibittheamylaseactivitytosomeextent.Furthermore,itshowedoneamylaseisozymebandusingPAGE,suggestingonlyoneamylaseisozymeexistingintheEndotheliumcorneumtentatively.ConclusionTheeffectsofmetalionsshouldbeconsideredintheprocessofEndotheliumcorneumamylase.　　Keywords：Endothe

5、liumcorneum；amylase；physico-chemicalproperties；isozyme鸡内金是雉科动物家鸡的干燥沙囊角质内壁,具有健胃消食、涩精止遗的功效,临床多用于食积不消、呕吐泻痢、小儿疳积、遗尿、遗精等症。现代药理研究认为,鸡内金主要含有胃激素、角蛋白、氨基酸等成分,有增加胃液分泌量和胃肠消化能力、加快胃的排空速率等作用[1]。目前对鸡内金中起作用成分的研究还不够深入,特别是对鸡内金所含的生化物质及其理化性质研究还缺乏深度。本实验探讨了鸡内金淀粉酶的理化性质和同工酶谱,其结果对深入研究鸡内金药理作用和进一步开发鸡内金产品具有一定的意义。9　　1实验

6、材料鸡内金,大连市炮台食品公司提供。其余试剂均为分析纯。分光光度计[7202B型,尤尼柯(上海)仪器有限公司]、垂直板电泳仪(JM-250型,大连捷迈科贸有限公司)。　　2实验方法　　2.1鸡内金淀粉酶液的制备称取生品鸡内金65g(湿重)、50℃烘干、粉碎成粗粉、加217mL的磷酸缓冲液(pH7.0,0.05mol/L),在30℃恒温水浴锅中保温3h(每隔30min搅拌一次)浸提,用纱布过滤,滤液静置1h,离心(3000r/min,30min),收集上清液于-4℃冰箱中保存。　　2.2酶活力测定参考文献[2]方法,采用碘-淀粉比色法进行酶活力测定。　　2.3同工酶的检测9参考

7、文献[3]用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行同工酶的检测。采用恒温电泳方式,整个电泳过程在4℃进行。　　3结果　　3.1粗酶提取液pH值及加入量的考察用不同量的酶提取液分别作用于1mL基质缓冲液,在系列pH值7.73、8.04、8.34、8.67、9.18的磷酸缓冲液作用下,测定酶活力。结果见表1。表1酶液量及pH对酶活力影响的优化（略）　　3.2酶反应的最适底物浓度用0.5mL酶提取液,在pH8.67条件下,配制不同底物浓度溶液,然后测定各浓度下的酶活力,在底物浓度达到1.8mg/mL时,酶催化速度达到最大,表