欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:36535185
大小:473.86 KB
页数:5页
时间:2019-05-11
《产琥珀酸大肠杆菌工程菌株的构建》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、万方数据研究报告中国酿造2010年第2期总第215期·25·产琥珀酸大肠杆菌工程菌株的构建岳方方,姜岷木,马江锋,于丽,刘树文,韦萍(南京工业大学生物与制药工程学院材料化学工程国家重点实验室,江苏南京210009)摘要:大肠杆菌在厌氧条件及不额外添加电r受体的条件下可利用葡萄糖进行混合酸发酵,主要产物为甲酸、乙酸和乙醇,丁-二酸及乳酸含最较低。为减少副产物的生成,使更多的代谢流流向丁二酸,本研究拟失活厌氧条件下甲酸、乙酸及乳酸主要生成途径相关的酶(乳酸脱氢酶和丙酮酸甲酸裂解酶)。借助Red重组系统和位点特异性重组技术,无痕敲除了野生大肠杆菌W3110染色体上编码2个酶的基因p蜊ldh,构
2、建了1株pf珠lJdh双突变重组菌JMl307(Apfl△脚,并引AJ'YC前后对比实验表明:JMl307(pTrc99a-pyc)较出发菌株解除了生长抑制,在89,L初糖条件F,发酵48h,菌体密度可提高至OD。02.5,产物丰要为丁二酸(2.8g/L),乙酸含量很低,无甲酸、乳酸牛成。关键词:大肠杆菌;琥珀酸:丙酮酸羧化酶;RED重组:无痕敲除中图分类号:Q786文献标识码:A文章编号:0254—5071(2010)02—0025—04ConstructionofengineeredEscherichiaco/JforsuceinateproducitionYUEFangfang,J
3、IANGMin+,MAJiangfeng,YULi,LIUShuwen,WEIPmg(StateKeyLaboratoryofMatcdals-O[JentcdChemicalEngineering,CollegeofBJotechnologyandPharmaceu6calEngineenng,NanjingUniversi(yofTechnology,Nanjin9210009,China)Abstract:Underanaerobicconditionsandintheabsenceofexogenouselectronaceeptors,Escherichiacolifermen
4、tsglucosetoamixtureofproductsconsistingofacetate,formateandethanol,aswellasasmallamountsoflaerateandsuccinatc.InordertoreducetheCO·productslactateandformate,aIdhpndoublemutanthasbeenconstructedbasedontheREDrecombinationsystemandthesite—specificrecombinanttechnology.Thefermentationresultsindicated
5、thatdeficientinbothofthetwoenzymesshowedsignificantgrowthdefectsbecauseofpyruvateaccumulationwhichwouldnegativelyaffectthephosphoenolpyruvate—dependentsugartransport.SinceE.col/lackstheanapleroticenzymepyruvatecarboxylase.pyruvateaccumulationandsuccinateformationinthisstraincouldbealteredbydirect
6、ingpyruvatetothesuccinatebranchwiththisenzyme.Hence,arecombinantplasmidpTrc99a-pycwasconstructedandtransformedtoJMl307.Resultsshowed:with8g/LinitialglUCOse,thecelldensityofJMI307(pTrc99a-pyc)enhancedtooD;∞2.5,andthemainproductwassuccinate(2.8∥L)withlittleaceticacid,andnoformicacidandlacticacidwer
7、eproduced.Keywords:EscherichiaCO北succinate;pyruvatecarboxylase;REDrecombinationsystem;knockoutwithnomark琥珀酸(又称丁二酸)作为‘种C4平台化合物,口J.被广泛用于医药产品、精细化工产品以及可生物降解的聚合物的前体。传统生产方法采用的是从丁烷经顺酐通过电解生产,生产污染大、成本高,严重抑制了琥珀酸的发展潜力。生物法制备琥珀酸以可再
此文档下载收益归作者所有