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《大肠杆菌琥珀酸和乙酸合成途径的删除及其重组菌株的D_乳酸发酵_周丽》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生物工程学报ChinJBiotech2011,January25;27(1):31−40journals.im.ac.cnChineseJournalofBiotechnologyISSN1000-3061cjb@im.ac.cn©2011CJB,Allrightsreserved.工业生物技术大肠杆菌琥珀酸和乙酸合成途径的删除及其重组菌株的D-乳酸发酵1111121周丽，田康明，左志锐，陈献忠，石贵阳，SurenSingh，王正祥1江南大学生物工程学院生物资源与生物能源研究中心工业生物技术教育部重点实验室，无锡2141222DepartmentofBiotechnol
2、ogyandFoodTechnology,DurbanUniversityofTechnology,Durban,SouthAfrica摘要:菌株CICIMB0013-030(B0013，ack-pta，pps，pflB)可积累D-乳酸作为主要发酵产物，然而副产物琥珀酸和乙酸的含量分别高达乳酸的11.9％和7.1％。为构建副产物含量低的产D-乳酸重组大肠杆菌菌株，本研究删除了菌株B0013-030的琥珀酸(frdA)和乙酸(tdcDE)合成途径，并考察了重组菌株在摇瓶和发酵罐中经两阶段发酵(好氧生长菌体和厌氧发酵产酸)利用葡萄糖发酵D-乳酸的性能。结果表明，分别构建含有
3、frdA::difGm和tdcDE::difGm突变盒的重组质粒，并利用Red重组系统将突变盒整合于染色体上的目的基因，再利用Xer重组系统去除抗生素抗性基因，依次获得了重组菌株B0013-040B(B0013-030，frdA)和B0013-050B(B0013-040B，tdcDE)。摇瓶发酵结果表明，frdA基因的删除使得菌株B0013-040B副产物琥珀酸的含量降低了80.8％；在7L发酵罐中进行乳酸发酵，菌株B0013-040B的D-乳酸产量达114.5g/L，光学纯度大于99.9％，但仍积累1.0g/L琥珀酸和5.4g/L乙酸。进一步删除了tdcD和tdcE
4、基因的菌株B0013-050B，在7L发酵罐中生产111.9g/LD-乳酸，乙酸和琥珀酸的合成量分别降低为0.4g/L，其他副产物含量也维持较低水平，表明该菌株具有较优良的D-乳酸发酵性能。关键词:D-乳酸，大肠杆菌，琥珀酸，乙酸EliminationofsuccinateandacetatesynthesisinrecombinantEscherichiacoliforD-lactateproduction111112LiZhou,KangmingTian,ZhiruiZuo,XianzhongChen,GuiyangShi,SurenSingh,1andZhengx
5、iangWang1TheKeyLaboratoryofIndustrialBiotechnologyofMinistryofEducation,CenterofBioresource&Bioenergy,SchoolofBiotechnology,JiangnanUniversity,Wuxi214122,China2DepartmentofBiotechnologyandFoodTechnology,DurbanUniversityofTechnology,Durban,SouthAfricaAbstract:WhenEshcerichiacoliCICIMB0013
6、-030(B0013,ack-pta,pps,pflB)wasusedforD-lactateproduction,succinateandacetatewerethemainbyproducts(asmuchas11.9and7.1%theamountoflactaterespectively).InordertodecreasetheReceived:May9,2010;Accepted:August11,2010Supportedby:Sino-SouthAfricaCooperationProgram(No.2009DFA31300).Corresponding
7、author:ZhengxiangWang.Tel:+86-510-85918121;E-mail:zxwang@jiangnan.edu.cn中非国际合作重点项目(No.2009DFA31300)资助。32ISSN1000-3061CN11-1998/QChinJBiotechJanuary25,2011Vol.27No.1byproductlevels,weinactivatedsuccinateandacetatesynthesisinB0013-030.Tworecombinantplasmidscontainingmutatio
