竹鼠肠道兼性厌氧纤维素降解菌的分离、鉴定及其产酶活性研究

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1、硕士硕士学位论文宁俊平竹鼠竹鼠肠道兼性厌氧纤维素降解菌的分肠道兼离、鉴定及其产酶活性研究性厌氧纤维素降解菌的分离、鉴定及宁俊平其产酶活性研究2014二○一四年五月分类号S816.79密级公开UDC硕士学位论文竹鼠肠道兼性厌氧纤维素降解菌的分离、鉴定及其产酶活性研究宁俊平学科专业动物营养与饲料科学指导教师邹优敬副教授、王士长教授论文答辩日期2014.5.27学位授予日期2014.6.30答辩委员会主席王士长教授广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集

2、体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。不保密。(请在以上相应方框内打“√”)论文作者签名：

3、日期：指导教师签名：日期：作者联系电话：电子邮箱：广西大学硕士学位论文竹鼠肠道兼性厌氧纤维素降解菌的分离、鉴定及其产酶活性研究竹鼠肠道兼性厌氧纤维素降解菌的分离、鉴定及其产酶活性研究摘要农作物副产品如秸秆等含有很高的纤维素成分，是一种潜在的自然资源，在全球资源危机的今天，利用其大力发展畜牧业，不仅可以充分利用资源，还能避免因秸秆燃烧对生态环境造成的污染。利用纤维素酶分解纤维素是利用纤维素资源的有效手段之一，目前产纤维素酶菌株多分离自反刍动物瘤胃液、堆肥、土壤等，所得降解纤维素能力较强的菌株多为厌氧菌株，由于培养条件严格，在生产中的应用得到限制。本研究以竹鼠肠道内容物作为微

4、生物来源，从中分离筛选出优良的兼性厌氧产纤维素酶菌株，为最大限度开发利用纤维素资源奠定基础，同时促进新能源、食品、以及畜牧业等相关行业的快速发展。本研究主要包括以下四部分内容：试验一：通过严格厌氧结合需氧培养，以羧甲基纤维素钠为唯一碳源对竹鼠肠道内容物进行涂布培养，初步分离出具有降解纤维素能力的菌株后，结合刚果红染色以及酶活测定复筛出所需目的菌株。试验结果显示，从竹鼠回肠、盲肠、结肠共得到17株菌株，根据菌株形态筛选出7株疑似纤维素降解菌，分别为来自竹鼠回肠的H-1、H-2菌株;盲肠的M-1、M-2、M-3菌株；结肠的J-1、J-2菌株；结合刚果红染色法所得到的透明圈与菌

5、落直径比，测定其发酵液酶活后，显示M-2、M-3酶活较高，分别为0.5029U/mL、0.4874U/mL。试验二：将来自盲肠的M-2、M-3菌株作为目的菌株，通过形态学观II广西大学硕士学位论文竹鼠肠道兼性厌氧纤维素降解菌的分离、鉴定及其产酶活性研究察、革兰氏染色观察，菌株生理生化实验，以及分子生物学鉴定确定该菌的种或属。试验结果证明：来自于竹鼠盲肠的M-2、M-3菌株的形态学特征观察结果，结合生理生化实验，并分别利用PCR对其16SrDNA序列扩增，经过克隆、测序后，在Genbank数据库里面BLAST结果表明，M-2属于肠杆菌科的沙雷氏菌属(Serratia)，M-

6、3菌株确定为肺炎克伯雷氏菌(Klebsiellapneumoniae)。试验三：挑选酶活相对较高的来自盲肠的M-2菌株作为目的菌株，测定不同发酵时间、碳源、氮源、接种量、温度及初始pH值对菌株M-2产酶活性的影响，对其产酶性质进行研究。试验结果表明：这6种因素对菌株产酶均有显著影响，并确定菌株最适产酶培养条件为：在菌株以葡萄糖为碳源，以酵母粉为氮源，初始pH7，40℃摇瓶培养24h，最佳接种量为4%时，能够表现出最大的产酶活性。关键词：兼性厌氧；纤维素降解菌；纤维素酶活性；16srDNAIII广西大学硕士学位论文竹鼠肠道兼性厌氧纤维素降解菌的分离、鉴定及其产酶活性研究TH

7、EISOLATIONANDIDENTIFICATIONOFFacultativeANAEROBICCELLULOSEDECOMPOSINGBACTERIAOFRHIZOMYSINTESTINEANDandRESEARCHONITSENZYMEPRODUCTIONACTIVITYABSTRACTStrawstalkcropscontainhighcellulose,whichisapotentialnaturalresource.Today,intheglobalresourcecrisis,makingthemostofthe