竹鼠肠道中厌氧纤维素降解菌的分离与鉴定

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1、广西大学硕士学位论文竹鼠肠道中厌氧纤维素降解菌的分离与鉴定姓名：曹晓燕申请学位级别：硕士专业：动物营养与饲料科学指导教师：王士长20120628竹鼠肠道中厌氧纤维素降解菌的分离与鉴定摘要纤维素占植物干重的33-50％，是世界上分布最广泛、含量最丰富的有机再生资源。分离发现高活力的纤维素降解菌或酶，将会为纤维素在新能源、材料、食品和动物饲料添加剂等行业中的应用提供广阔平台。有关纤维素降解菌的研究报道多分离自林场、土壤、动物粪便、堆肥、废纸浆、温泉和反刍动物瘤胃液等，而对于肠道中的纤维素降解菌的研究报道较少。本实验拟从中华竹鼠肠道

2、中分离具有高活性的、产纤维素酶的厌氧微生物。主要内容及结果如下：对竹鼠肠道中回肠，盲肠，结肠三个部位的纤维降解菌的数量进行检验，发现盲肠部分具有相对较多的厌氧纤维降解菌。试验中运用两种(微晶纤维素和羧甲基纤维素钠)不同成分的培养基进行初筛，后又经纤维二糖多次复筛后，分别筛选出两株相对较理想的厌氧菌种，分别标记为MCC厌氧纤维降解菌和CMC厌氧纤维降解菌。革兰氏染色结果显示，MCC菌和CMC菌染色后均为紫色且为杆状，说明其均为革兰氏阳性杆菌。酶活力测定结果表明，MCC和CMC厌氧纤维降解菌酶活力都为0．142u／m01。为鉴定两

3、种菌株的种属选择细菌通用引物27F和1492R对其16SrDNA进行扩增测序和系统发育树分析，结果显示MCC菌、CMC菌和Clostridiumbutyricum即酪酸梭状芽孢杆菌的亲缘关系最近，初步证明两株菌均属于C]ostridium属即梭菌属。结论：从竹鼠盲肠中成功分离的MCC和CMC厌氧菌具有较高的纤维降解酶活力，其16SrDNA测序相似比较分析显示其为梭菌属。试验结果为应用酪酸梭状芽孢杆菌药物制剂，提高动物肠道纤维素的利用率，开发绿色粗饲料微生物添加剂的研究提供了理论基础。关键词：竹鼠肠道厌氧纤维素降解菌16SrDN

4、ATHEISOLATIONANDIDENTIFICATIONOFANAEROBICCELLULOLYTICBACTERIAININTESTINEOFRHIZOMYSABSTRACTCelluloseaccoulltedfor33．50％ofplantdryweight，whichisthemostabund肌torganicrenewableresourcesandwidelyusedintheworld·DomestlcresearchesonCellulolyticBacteriahavebeenreportedmore，

5、butsourcesofthestrainaremainlyfromForest，soilandanimalmanure，compost，wastep印erpulp，hotsprings，lumenliquidandSOon．TherearelessreseatchesaboutCellulolvticBacteriainintestine．TheexperimentwasabouttoisolatehighactiVeanaerobicmicroorganismproducingcellulosefromChineserhi

6、zomysIntestlne·Theexperimentresearchesfromthreeaspects，microorganism，biochemls时andmolecule．inordertoimprovetheutilizationofcelluloseinanimalintestine，erdlanceanimalimmunity,andreducetheutilizationofantibioticsastheoretlcalreferences．Themaincontentandresultsofthisres

7、earchshowasfoliows：Itwasdiscoveredthattherearemorerelativelymoreanaerobiccellulolytlcbacteriaincaecumpart，wheninspectingamountofanaerobiccellulolytlcbacteriainileum，cecum，andcolonofrhizomys．Theexperimentwasprlm纠哆screenedbyutilizingtwokindsofmediawithdifferentcomposl

8、tlon(Microcrystallinecelluloseandcarboxymethylcellulosesodium)，andscreenedseveraltimesagainbycellobiose．Tworelativelyidealanaerobicbactena