SMPQC002900菌种标准管理规程

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1、标题菌种标准管理规程编码SMP-QC-0029-001.0目的1.1规范生测组菌种的购买、接收、转种传代、保藏、使用、标签及废弃等方面的工作。2.0范围2.1适用于本公司检验和生产用菌种的管理。3.0职责3.1质量控制（QC）部对本操作规程实施负责。4.0定义4.1CMCC：国家医学微生物菌种保藏管理中心（ChinamedicalCultureCollection）菌株：又称品系，在病毒中称为毒株，表示单个分离物的纯培养及其后代。4.2非致病菌：不引起宿主疾病的细菌。4.3致病菌：能引起宿主致病的细菌4.4条件致病菌：在正常情况下对人体无害，但当有机体的防卫

2、功能减弱或该菌寄居部位发生改变时，可引起机体病变的微生物。如大肠杆菌进入腹腔后可引发腹膜炎。5.0规程菌种接收安瓿G175%酒精消毒液体培养基复壮G1划线法固体平板培养G25.1菌种管理流程图：工作菌种W3工作菌种W5菌种鉴定转接工作菌种W4是转接转接转接保藏保藏菌种G2保藏菌种G4保藏菌种G3否控制章：第6页共6页标题菌种标准管理规程编码SMP-QC-0029-00销毁销毁销毁销毁5.2菌种的来源5.2.1药品微生物检验用标准菌株来自中国医学菌种保藏中心（ChinamedicalCultureCollection）在冷冻干燥菌种安瓿标签上标有CMCC(B)

3、26003或CMCC(F)98003等字样。(B)代表细菌，(F)代表真菌，数字为菌株的标准代码。5.3公司订购菌种接收与保藏5.3.1公司订购的菌种到货时，其运输条件应符合菌株规定的运输要求，比如检查用来维持菌株运输过程中规定储备温度的冰袋仍应起到保温的效果。5.3.2菌种名称、编号、特征、数量应与订购要求一致。5.3.3检查用来存放菌种的包装如安瓿或试管等，应完好，无破损。5.3.4从中国医学菌种保藏中心购买的标准菌株冻干粉剂管，直接存放于2～8℃冰箱保存。并填写《标准菌株接收与发放记录》（R-SMP-QC-0029-02）。5.3.5从菌种保藏中心购买

4、的原始菌种是冻干粉剂，使用时首先需复活冻干菌种，应按（菌种保藏中心提供的）相关资料的要求进行复溶、培养和保存。5.3.6核对无误后及时填写《菌种购买与接收记录》（R-SMP-QC-0029-01）。5.4菌种的复活5.4.1原始菌种是玻璃安瓿装5.4.1.1清洁安瓿，在安瓿的外表面喷上75%的酒精并让其自然风干。5.4.1.2用砂轮在安瓿四分之一处环割，用手轻轻将安瓿掰开(开启安瓿时必须小心，因为安瓿遇热时可能会破裂)5.4.1.3无菌操作，用无菌滴管吸取0.2ml适宜的液体培养基至安瓿中，轻轻地旋转安瓿以使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解，用无菌吸管

5、将安瓿内菌液转接到相应的液体培养基中[营养肉汤或大豆胰蛋白胨肉汤(TSB)适用于枯草芽胞杆菌、白色念珠菌、黑曲霉、金黄色葡萄球菌和沙门菌；胆盐乳糖液体培养基(BL)适用于大肠杆菌、铜绿假单胞菌；硫乙醇酸盐液体培养基适用于梭状芽胞杆菌等厌氧微生物，根据菌的不同培养温度要求，细菌置30～35℃培养18～24小时，真菌置23～28℃培养24～48小时。观察培养基是否混浊，混浊说明菌种复活生长；若在规定的时间内没有混浊，细菌可延长培养至7天，真菌可延长培养至14控制章：第6页共6页标题菌种标准管理规程编码SMP-QC-0029-00天。仍不混浊，应经过高压蒸汽灭菌后

6、丢弃。取混浊的培养液，接种针划线接种于斜面培养基上，细菌继续培养18～24小时，真菌23～28℃培养24～48小时。5.5菌种确认5.5.1当菌种复活以后，微生物实验室还应确认菌种的纯度。用无菌接种环从液体培养基中取细菌培养物接种到宜于该菌种生长的平板上培养，再按照菌种鉴定标准操作规程，对菌种进行鉴定确认。所有购入的菌株均应做复活和确认实验。及时填写《微生物鉴别记录》（R-SOP-QC-0009-01）。5.6菌种的保藏5.6.1菌种短期保藏经常使用的菌种采用低温斜面法保藏法（芽孢菌、酵母菌和霉菌2个月移种一次；无芽孢的细菌每月移种一次）。5.6.2甘油冷冻

7、保藏：将待保藏菌株接种平板或琼脂斜面，适宜温度下培养适宜的时间后（细菌30～35℃培养18～24小时，白色念珠菌23～28℃培养24～48小时，黑曲霉23～28℃培养5～7天），用无菌接种环轻轻刮取菌苔，并通过与试管壁之间的摩擦使细菌充分扩散到预先装于试管中的无菌蒸馏水中。黑曲霉则使用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的无菌蒸馏水将孢子洗脱，然后用适宜的方法吸出孢子悬液至试管中。调节菌液浓度，向已制备好的菌悬液中加入等体积、含20%无菌甘油的TSB或营养肉汤，轻轻振摇小管，使内容物充分混合，分装于无菌小管，制备好的甘油管在-30℃条件贮存。5.7菌种的传

8、代和使用5.7.1采用低温斜面法或甘油管保藏的微生物