HPLC技术结合微透析在抗脑缺血药物筛选中的应用

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1、浙江大学硕士学位论文HPLC技术结合微透析在抗脑缺血药物筛选中的应用姓名：李惠申请学位级别：硕士专业：生物医学工程指导教师：郑筱祥2003.5.1浙江大学硕士学位论文(2003)摘要r／脑缺血是危害人类健康的主要疾病之一。神经递质，尤其是氨基酸类和单L1胺类神经递质，与脑缺血的关系一直是研究的一个重要方面a，本文将高效液相色谱(HPLC)技术及将其与微透析技术结合，建立大、小鼠氨基酸和单胺类神经递-f质的检测方法并应用于抗脑缺血药物的药理药效研究。利用HPLC和荧光检测的高灵敏度，分别建立了适用于脑匀浆及脑透析液中谷

2、氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、Y一氨基丁酸(GABA)、牛璜酸(Tau)等氨基酸类神经递质和去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和5一羟色胺(5-HT)等单胺类神／经递质HPLc测定法。哒些方法操作方便、分析速度较快、分析结果可靠。、l、／在建立以上方法的基础上，本文采用结扎小鼠双侧颈动脉造成脑缺血。探讨，脑缺血后小鼠脑内氨基酸类神经递质的改变以及可达灵的作用。实验发现脑缺血＼小鼠脑内兴奋性氨基酸(EAA)与抑制性氨基酸(IAA)均升高，且IAA升高的幅度大于EAA。推测这是对EAA过量释放的保护性反应，拮抗E

3、AA的兴奋毒性。因此GIu／GABA的比例可以基本反应脑缺血的程度。在脑缺血前给小鼠灌胃不同剂量的可达灵，明显抑制了脑内Glu／GABA比例的降低，证明可达灵对小鼠脑缺血引起的损伤具有一定保护作用。』／采用大鼠中动脉阻塞脑缺血再灌注模型，将微透析与HPLC结合，建立精确实时检测脑缺血大鼠纹状体中神经递质的方法，并探讨了葛根素对该脑区单胺类递质的影响。f结果显示缺血后，5一HT的含量升高。在缺血40min后，5一HT升、至峰值(p

4、05)，随着再灌注时间的增加5一HT含量逐步下降，但仍保持在一个较高水平。给予葛根素后，脑缺血大鼠纹状体透析液中5一HT水平的上升幅度明显减小，在缺血40分钟后，5一HT含量升高较模型组幅度明显下降(p

5、筛选提供了新的途径。浙江大学硕士学位论文(2003)AbstractCerebralischemiaisaleadingcauseofdeathandserious，long—termdisabilityinadults．Therelationofneurotransmitters，espicallyneuronalaminoacidandmonoamine，andcerebralischemiaiSalwayshighlightenedtheseyears．Inthispaper，HPLCandmicrodialy

6、sistechniquewerecombinedtoestablishmethodswhichcandetecttheseneurotransmitters．Moreover，themethodswereemployedtostudytheeffectsandmechanismsofanti—ischemiamedicine．UsingHPLCandRF，methodsdetectingmonoaminetransmitters，suchasNE，DA，5一HT，andAAtransmitters，suchasAsp

7、，Glu，Tau，GABA，indialysateandbrainhomogenatewerefounded．Themethodswereconvenientandeffective．Usingthesemethods，thechangeofneurotranismittersinthebrainofcerebralischemiamiceinducedby1igationofdoublelateralcarotidswasdetected．TheeffectsofKedalingwerealsostudied．In

8、thestudy，thereleaseofE从andI从inthebrainofcerebralischemiamiceincreasedsignificantly．AndtheincreaseofIAAWaShigher．SoGIu／GABAcanreflectthegradeofcerebralischemia．Afterthemicewe