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时间:2019-05-10
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1、唐古特青兰提取物齐墩果酸的药代动力学研究作者:廖敬礼,顾健,李婧,张亮亮,钟锋,姚峰【摘要】目的建立测定齐墩果酸血浆浓度的HPLC方法,研究唐古特青兰醇提取物中齐墩果酸的药代动力学规律。方法采取甲醇-水(85∶15,V/V)为流动相,DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm,5μm)为固定相,紫外检测波长为215nm测定,大鼠灌胃给药3.0,1.5g/kg,用HPLC法测定给药大鼠血浆中齐墩果酸的含量,采用药代动力学软件DAS(ver2.0)处理,得到齐墩果酸的药代动力学参数。结果大鼠灌胃高剂量和低剂量给药的齐墩果酸主要参数分为AUC0-t为49450.915mg/(L·min)和3
2、7336.884mg/(L·min),tl/2为85.154min和55.215min。结论齐墩果酸在大鼠体内的代谢符合一室模型,吸收、消除较快。【关键词】唐古特青兰;齐墩果酸;药代动力学;高效液相色谱 唐古特青兰又名甘青青兰(DracocephalumtanguticumMaxim,简称DtM),藏文译音“知羊格”,是藏医常用药材,属多年生唇形科草本植物,生长在海拔1900~46007m的青藏高原。其性寒、味甘苦,可清肝胃之热,用于治疗胃炎、肝炎、头晕、关节炎、胃溃疡、神疲等[1],主含黄酮苷、挥发油、氨基酸、甾类、齐墩果酸、熊果酸、胡萝卜苷等[2]。研究发现,DtM的醇提液可以有效降低大鼠
3、的血糖浓度,具有降血糖的药理作用,DtM水提液可升高缺氧动物红细胞SOD含量、清除氧自由基,降低整体耗氧量,具有抗心脑组织缺氧的作用,可改善缺氧造成的血液流变学异常、血小板减少、右心室肥厚及组织病理学损伤。其药用价值显著,但目前对唐古特青兰用于治疗这方面疾病的研究不少,大多数对其在体内的代谢还不清楚,或仅限于理论上的论述,不便于对其进行研究和利用,且未见文献报道。为此我们对DtM的醇提液中齐墩果酸在大鼠体内的代谢进行药代动力学研究。 1材料与仪器 1.1动物健康Wistar雄性大鼠12只,体质量(250±50)g,由四川省实验动物中心提供,合格证号:SCXK[川]2008-14。 1.2
4、仪器岛津LC-10AT高效液相色谱仪;DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm,5μm);SPD-M10AvpUV-VIS检测器;CTO-1OA柱温箱;C-R7Ae色谱数据处理仪;SIL-1OADvp自动进样器;旋转蒸发仪(上海夏丰实业有限公司);精密天平(沈阳龙腾电子有限公司);台式高速离心机;HY调速多用振荡仪(江苏正基仪器有限公司);YGL系列氮吹仪(成都雅源科技有限公司);微孔滤膜(0.45μm)。 1.3试剂及药品7甲醇;醋酸乙酯;无水乙醇;高纯水(自制);肝素;唐古特青兰(采自青海,经成都中医药大学中药室鉴定为唇形科植物唐古特青兰的带根全草。) 1.4药物的制备取11
5、5g原药材,加入700ml95%的乙醇溶液中,加热煮沸2h,过滤,通过旋转蒸发仪回收乙醇,浓缩成相当于生药量0.45,0.90g/ml的溶液,保存备用。 2方法与结果 2.1色谱条件DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-水(85∶15,V/V);柱温30℃;流速1.0ml/min;检测波长215nm。 2.2血样处理在100μl血浆加入0.1ml乙酸乙酯,振荡5min,6000r/min离心,取上清液,加0.3ml甲醇沉淀蛋白,振荡5min,6000r/min离心,取上清液,50℃氮气吹干。用1.0ml流动相溶解,取10μl进样分析,测定峰面积。
6、2.3对照品溶液的制备取对照品恒温干燥至恒质量,精密称取5.0mg齐墩果酸对照品,置5.0ml容量瓶中,用流动相溶解,超声5min,定容至5.0ml,得到1.0mg/ml对照品溶液。7 2.4标准曲线的制备精密量取大鼠空白血浆0.1ml,分别加入齐墩果酸标准品,配制成血浆浓度分别为:10,20,30,40,50μg/ml血浆溶液,按上述血样处理过程处理,分别取10μl进样,记录峰面积,以峰面积值(Y)对齐墩果酸的浓度(X)进行线性回归。 2.5精密度实验取大鼠空白血浆0.1ml,用标准品配制成浓度分别为10,20,40μg/ml的血浆溶液,按“2.2”项操作,测定样品峰面积。代入标准曲线方
7、程,计算测得浓度,考察日内和连续5d的日间变异情况。 2.6回收率实验分别用空白血浆配制齐墩果酸质量浓度为10,20,40μg/ml,的样品,按“2.2”项操作,测定样品峰面积。代入标准曲线方程,计算测定浓度。 2.7动物实验大鼠给药前禁食,自由摄水,实验随机分为两组,每组6只,分别为高、低剂量组。按3.0g/kg,1.5g/kg灌胃给药。给药后5,10,20,30,45,60,90,120,
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