复方茵黄解毒汤抗HBV有效部位和成分研究

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1、广东工业大学博士学位论文复方茵黄解毒汤抗HBV有效部位和成分研究姓名：许重远申请学位级别：博士专业：应用化学指导教师：张焜20091020广东T>lk人学博fj学位论文魏酸、大黄酸的斑点及空白进行部分或全程扫描。比较紫外双波长扫描图谱，得到供试品的扫描图在与盐酸小檗碱标准品峰的位置(约40mm～50mm)、咖啡酸标准品峰的位置(约125mm'----135mm)、阿魏酸标准品峰的位置(约145mm"---155mm)有相对应的峰。另外，成品在大黄酸的位置(约155mm"--'165mm)的峰很明显，但大黄标准品由于受前沿溶剂荧光带峰f约165mm'-"180l-nm)的

2、影响较大，峰不明显，但还仍可看到由大黄酸引起的肩峰。比较可见光单波长扫描图谱，可见供试品的扫描图在与盐酸小檗碱标准品峰的位置(约40mm～50I】[u11)、大黄酸标准品峰的位置(约160Ia-tm'---"170mm)相对应，空白峰对于大黄酸的影响已消除。采用HPLC法对乙酸乙酯提取部位的有效成分咖啡酸和阿魏酸进行了分析。用HypersiLBDSC18作为分析柱，流动相为甲醇．0．01mol／L磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH为3．7)，得到的峰形较好，并且在18分钟内出峰完全。三个批号的含量分别是咖啡酸：70．30、69．62、75．35u∥mL和阿魏酸37．25、35．

3、68、38．72u∥mL；加样回收率的咖啡酸和阿魏酸平均值分别为99．29％、99．38％。结果表明，本方法简单、可靠。可作为复方茵黄解毒汤中咖啡酸和阿魏酸的含量控制的一种有效方法。在此基础上采用毛细管电泳法(HPCE)对其进一步分析。高效毛细管电泳法在现今的药物分析中，比HPLC具有柱效高、分析速度快、进样体积小、易清洗等优点；而且HPCE更适合于直接分析水溶液及未经纯化的样品，不需要消耗大量的高纯有机试剂，节约了运行费用。在同样电泳条件下，测定咖啡酸和5HJ魏酸对照品，并与复方茵黄解毒汤的HPCE图谱相对比，在8分钟和6分钟的时问段上相对应；同时，采用阳性对照法对样

4、品中咖啡酸和阿魏酸进行定性，确认了8分钟的峰为咖啡酸和6分钟的峰为阿魏酸。采用高效快速、集灵敏度和高选择性于一体的液相色谱．质谱联用技术对乙酸乙酯和正丁醇部位进行分离分析。通过液相色谱．质谱联用技术获得了液相紫外图谱和总离子流色谱图，并采用MS和LC．MS／MS扫描模式分析，从乙酸乙酯部位鉴定了其中9个活性成分。分别是：咖啡酸、阿魏酸、大黄酸、芦荟苷、乙酰紫草素、木兰花碱、原儿茶碱、岩白菜素、异栀子苷。从正丁醇部位鉴定了其中8个活性成分：分别是：轮环藤酚碱、栀子苷、铃兰毒苷、野鸢尾苷元、黄芩苷、千层纸苷、白杨素苷、汉黄芩素苷，这些活性成分的确定，为其临床应用和迸一步开发

5、利用提供了科学依据。摘要对三氯甲烷和乙酸乙酯提取部位进一步分离获得8个成分，分别为大黄酚、大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚、小檗碱、咖啡酸、阿魏酸、大黄酸。并对这些化合物进行体外抗HBV细胞活性评价。上述各成分和IFN的各剂量组HBsAg和HBeAg的OD值均有明显的抑制，且对HBsAg的抑制强度与IFN相当，尤以大黄素、芦荟大黄素、小檗碱较强。各成分对HBsAg和HBeAg的抑制率并不完全呈剂量相关性，仅小檗碱和大黄素呈一定的剂量相关性，且同时对HBsAg和HBeAg的具较强的抑制作用。关键词：复方茵黄解毒汤；抗乙肝病毒；有效成分；指纹图谱；2．2．15细胞；高效液相色

6、谱；毛细管电泳色谱；液质联用广东T业人学flI；Ij学位论文ABSTRACTInthisessay,CompounddecoctionofYinchenhaoandHuanglianjiedu(CDYH)(DecoctionofYinchenhao+DecoctionofHuanglianjiedu)wasselectedasthemainresearchobject，transfectionHBV(HepatitisBVirus，HBV)2．2．15cellswaschoosedasamodeltotestanti—hepatitisBviruseffectsofCD

7、YHanditsmainactivecomponents／nvitro．Basedontheresultsofitsanti-hepatitisBvirusinvitro，theeffectiveComponentsandactivityextractsofCDYHwerestudiedandanalysed．ToestablishthequalitystandardsoffingerprintingoftheCDYI-I，thequalitativeandquantitativestudyofsomeeffectivecomponent