味噌抗HBV活性成分研究

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1、中图分类号盟!垒：垒UDC610硕士学位论文学校代码!Q§三三密级公开味噌抗HBV活性成分研究Studyontheanti·-HBVactiveconstituentsofmiso作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：陈权威药学药物化学药学院董俊兴研究员论文答辩日期Z业：苎：17答辩委员会主中南大学二。一三年五月V／原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共

2、同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：：醯担益日期：2Q!三年上月且日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。昧噌抗HBV活性成分研究摘要：乙型肝炎病毒是一种嗜肝病毒，主要存在于肝细胞内并损害肝细胞，引起肝细胞炎症、坏死、纤维化，给人类的健

3、康造成巨大威胁。目前临床抗HBV药物主要为核苷类药物，此类药物能有效地抑制病毒复制，但不能彻底清除病毒，而且停药后易复发，容易导致耐药性等问题。从天然产物中寻找具有抗HBV活性的先导化合物，对开发新型抗HBV药物具有重要意义。前期研究发现味噌具有较好的抗HBV活性，进一步研究发现其活性部位为正丁醇萃取部位。在HepG2．2．15细胞模型体外抗HBV活性筛选的指导下，对味噌抗HBV活性部位开展系统的化学成分研究，评价了分离得到的单体化合物的体外抗HBV活性，初步分析了异黄酮类活性化合物的构效关系。味噌(办圣，miso)是日本的一种传统大豆发酵产品，与中国的豆瓣酱、豆豉，日本的纳

4、豆，韩国的chungkookjang、doenjang等相似，在亚洲国家作为调味品食用具有悠久的历史。本课题通过硅胶柱色谱、SephadexLH一20柱色谱、C18反相柱色谱和PHPLC等手段对味噌抗HBV活性部位进行分离纯化，从中分离得到33个化合物，通过ESI．MS、1H-NMR、13C-NMR、HMBC等波谱分析，鉴定了其中27个化合物，分别为：环．(脯氨酸．甘氨酸)(FSE．1)、环．(苯丙氨酸．酪氨酸)(FSE．2)、环．(亮氨酸．酪氨酸)(FSE．3)、47，7，8一三羟基一6一甲氧基异黄酮(FSE一4)、47，5，7，8一四羟基异黄酮(FSE-5)、4’，7，8

5、一三羟基异黄酮(FSE．6)、黄豆黄素(FSE一7)、染料木素(FSE．8)、大豆素(FSE．9)、异亮氨酸(FSE．10)、缬氨酸(FSE．11)、亮氨酸(FSE．12)、焦谷氨酸甲酯(FSE．13)、酪氨酸(FSE．14)、N．甲基亮氨酸(FSE．15)、苯丙氨酸(FSE．16)、苯丙氨酸甲酯(FSE一17)、N一乙酰苯丙氨酸(FSE一18)、谷氨酸(FSE．19)、甘氨酸(FSE．20)、天冬氨酸(FSE．21)、尿嘧啶(FSE一22)、胸腺嘧啶(FSE．23)、山嵛酸(FSE．24)、棕榈酸(FSE一25)、邻苯二酚(FSE．26)和胡萝卜苷(FSE．27)。单体化合

6、物涉及3个环肽类、6个异黄酮类、12个氨基酸类、以及6个其他类化合物，其中24个化合物为首次从味噌中分离得到，18个化合物为发酵作用下新生成的二次成分。采用HepG2．2．15细胞模型对分离得到的27个单体化合物进行体外抗HBV活性评价，首次发现了5个具有一定抗HBV活性的化合物(FSE一5、FSE一6、FSE．13、FSE一19和FSE．23)。化合物FSE．13对HepG2．2．15细胞表面抗原和e抗原分泌均具有抑制作用，最大抑制率为22．9％禾1142．7％(500．01ag／mL，3．50btM)；化合物FSE．19特异性地抑制e抗原的分泌，最大抑制率为37．6％(5

7、0099／mL，3．409M)；化合物FSE．23对表面抗原和e抗原分泌均具有抑制作用，最大抑制率为50．2％和41．3％(2501ag／mL，1．98ptM)；化合物FSE．5和FSE．6对表面抗原和e抗原分泌具有抑制作用，最大抑制率分别为19．9％和17．1％(1001ag／mL，0．359M)，15．4％和24．6％(599／mL，18．5nM)。初步分析了活性异黄酮类化合物的构效关系：异黄酮母核无6位甲氧基取代对化合物的抗HBV活性具有一定作用，表现为FSE一6>FSE．4；8位羟基取代可能有助