TLR4及NFκB信号转导通路在大鼠慢性高眼压视网膜损伤中的作用及机制的探讨

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1、中国医科大学博士学位论文TLR-4及NF-κB信号转导通路在大鼠慢性高眼压视网膜损伤中的作用及机制的探讨姓名：沙倩申请学位级别：博士专业：眼科学指导教师：高殿文20090301材料与方法1、大鼠慢性高眼压模型的制备：烧烙3条巩膜静脉术中联合丝裂霉素的应用建立大鼠慢性高眼压模型。TONO．PENII型笔式眼压计测量术前，术后30min、2h、1d、3d、7d、14d、28d、56dI艮：压。2、光镜下视网膜形态学的观察：HE染色，并测量视网膜内界膜至外界膜距离即视网膜厚度。3、模型建立后2h、1d、3d、7d，、4

2、d、28d、56d分别取5只高眼压组、假手术组及空白对照组大鼠鼻侧一半视网膜，在视网膜铺片上行免疫组织化学染色，在激光共聚焦显微镜下观察视网膜TLR4、小胶质细胞的表达情况。4、应用RT-PCR法检测各组视网膜组织中TLR4、小胶质细胞的基因mRNA表达及Western．Blot法检测各组视网膜组织中TLR4、小胶质细胞的蛋白质的表达，统计结果均以均数士标准差表示，多组均数间的比较用oneway．ANOVA分析，手术组与空白对照组均数间的比较用配对t检验分析，均用SPSSl3．0软件进行统计分析。5、小胶质细胞活

3、化模型的建立：在小胶质细胞的培养基上划痕建立的小胶质细胞活化的细胞模型，应用RT-PCR法检测各组小胶质细胞中TLR4、P50、IL．6、TNF．a的基因rnlLNA表达及Western．Blot法检测各组视网膜组织中TLR4、P50、IL．6、TNF．a的蛋白质的表达，并检验封闭NF．r,B信号通路后各组视网膜组织中P50、IL．6、TNF．a的蛋白质及基因mRNA的表达，统计结果均以均数士标准差表示，多组均数间的比较用oneway．ANOVA分析，划痕组与对照组均数间的比较用配对t检验分析，均用SPSSl3．

4、0软件进行统计分析。结果1、大鼠慢性高眼压模型眼的术后各时间点的眼压与假手术组及空白对照组的差异具有统计学意义。2、大鼠慢性高眼压模型眼的术后各时间点的光学显微镜显示视网膜厚度经历一由厚变薄的过程。3、大鼠慢性高眼压模型眼的术后各时间点的免疫组化结果显示TLR4和小胶质细胞在视网膜组织中早期即有表达，术后7d达高峰。24、大鼠慢性高眼压模型眼的术后各时间点的Western．Blot显示TLR4和小胶质细胞在视网膜组织中早期即有表达，结果显示TLR4和小胶质细胞在时空上具有相关性。5、小胶质细胞活化的细胞模型的各实

5、验组及各时间点的Western．Blot、RT-PCR显示TLR4、IL．6、TNF．0【、P50的蛋白表达组间差异具有统计学意义。结论1、正常大鼠视网膜组织的色素上皮层可见TLR4的少量表达，并可见静态的小胶质细胞存在。2、TLR4在大鼠慢性高眼压不同时间点的视网膜上的表达，体现了其在大鼠慢性高眼压视神经退行性病变中的免疫调节作用。3、小胶质细胞的活化与TLR4在时空表达上具有相关性。4、TLR4及其信号通路在小胶质细胞的激活过程中具有重要的作用，TLR4与小胶质细胞的激活呈正反馈调节作用。关键词慢性高眼压，神

6、经损伤，小胶质细胞，Toll样受体4，核转录因子，肿瘤坏死因子．(It，白介素．6，●英文论著摘要DiscussionofTOLL——likeReceptor4andItsNF--KBSignalTransductionPathwayattheRatsRetinalInjuryandMechanismwithChronicIOPElevationIntroductionAtpresentglaucomahasbeenlistedasintheworldthesecondblindingophthalmopathy

7、,butitspathogenesisalsonotveryclear,intheworldstilldidnothaveonekindofopticnerveprotectionmedicinetobeabletoinvestthroughtheUnitedStatesFoodandDrugSurveillanceAdministrativebureau’Sverificationauthorizationintotheclinicaluse．Atpresenturgentneedstoprotecttogla

8、ucomaopticnerveconductsthedeepresearch，butthenerveimmunityprotectionisproposesmostnewlypreventsRGCstocarryononewhichofstrategiesthenatureloses．Worldwide，glaucomadamagetheopticnerveandopti