RNA干扰技术沉默Her2neu基因对前列腺癌作用的实验研究

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1、RNA干扰技术沉默Her-2／neu基因对前列腺癌作用的实验研究ExperimentalStudyontheEffectofSilencingoftheHer-2／neuGenebyRNAInterferenceinProstateCancer研究生童宣莶指导教师处堡4昌教援导师小组成员戴玉里数援率本课题获江苏省“135工程”医学重点学科基金、2006年度人事部留学回国人员科技活动项目择优资助经费启动类项目、2006年度南京市医学科技发展项目计划正式立项及经费资助。南京大学医学院附属鼓楼医院泌尿外科二零零九年五月二十日学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是我

2、在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中做了明确说明并表示谢意。论文作者签名日期关于学位论文使用授权的声明本人完全了解南京大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权南京大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名—1厶—jL．

3、日{J吾近20年来随着人口老龄化及生活条件的改善，我国前列腺癌发病率逐渐增加，己跃居我国男性泌尿生殖系统恶性肿瘤的第3位。临床上前列腺癌经内分泌治疗18"36个月后，常会变成激素非依赖性前列腺癌，目前尚无有效的手段治疗。其转变的机制十分复杂，目前雄激素受体(androgenreceptor，AR)及其所介导的信号传导通路逐渐成为该领域的主要研究方向，并取得了许多重要的进展。研究发现表皮生长因子受体家族成员之一Her．2／neu蛋白过表达可通过交叉激活(transactivation)AR、不依赖雄激素的存在而激活AR的转录，引起前列腺癌的发生及发展，可能与激素

4、非依赖性前列腺癌的转变有关。基于Her-2／neu在前列腺癌发生发展及激素非依赖性前列腺癌转变中可能作用的研究结果，在导师的指导下，我设计了本课题。我们首先在前列腺癌患者标本中检测Her-2／neu蛋白及AR的表达情况，明确Her-2／neu蛋白在前列腺癌组织中的表达及其与前列腺癌Gleason评分与AR的关系；在细胞实验水平及动物实验水平采用RNA干扰(RNAi)技术沉默人前列腺癌PC一3M细胞中Her-2／neu基因，降低Her．2／neu蛋白的表达，观察其对前列腺癌生长的影响，为今后临床应用针对Her-2／neu的前列腺癌靶向治疗提供理论依据及实验研究结

5、果。本课题从细胞实验水平及动物实验水平发现用RNAi技术沉默Her-2／neu基因对人前列腺癌PC．3M细胞生长及成瘤有抑制作用，首次用免疫组织化学方法证实PC一3M细胞及裸鼠PC一3M细胞移植瘤中Her-2／neu蛋白呈强阳性表达；首次在动物实验水平证实RNAi技术沉默Her．2／neu基因对前列腺癌PC．3M细胞移植瘤生长有一定的抑制作用。英文缩略词表亩未犬．芳医学院博士研究生毕业论文2QQ5级博士生指导教师(姓名、职称)：逊堡』昌塾拯博士生导师小组成员：戴玉旦数握中文摘要第一章绪论临床上前列腺癌经内分泌治疗18～36个月后，通常会变成激素非依赖性前列腺癌

6、。其转变的机制十分复杂，曾有克隆选择学说、癌细胞适应学说、信号传导途径改变学说、雄激素受体(AR)变异学说等多种推测。目前AR及其所介导的信号传导通路逐渐成为该领域的主要研究方向，并取得了许多重要的进展。Her-2／neu基因是原癌基因，通常处于非激活状态。近年来的研究发现Her-2／neu在乳腺癌、卵巢癌、大肠癌、前列腺癌及肺癌等恶性肿瘤的发生、发展、治疗及预后中起着不同程度的作用。例如Her-2／neu在20～30％的人乳腺癌中存在过表达，针对Her-2／neu蛋白的单抗已证明在Her-2／neu蛋白过表达的乳腺癌中有很明显的治疗作用。在前列腺癌的研究中发

7、现Her一2／neu蛋白过表达可通过交叉激活(transactivation)AR、不依赖雄激素的存在而激活AR的转录，引起前列腺癌发生及发展，可能与激素非依赖性前列腺癌的转变有关，这引起了研究者们的高度兴趣。本研究课题在前列腺癌患者标本中检测Her-2／neu蛋白的表达情况，进一步明确Her-2／neu蛋白在前列腺癌组织中的表达及其与患者I晦床病理特征的关由意火芳医学院博士研究生毕业论文系；采用RNA干扰(RNAi)技术观察沉默前列腺癌PC一3M细胞中Her-2／neu基因，降低Her-2／neu蛋白的表达对前列腺癌细胞是否有明显的抑制生长或增加凋亡的作用；

8、本研究课题还采用RNAi技术尝试治疗前