GATA3在哮喘大鼠肺组织中的表达及其对气道炎症的影响

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1、____华中科技大学同济医学院博士学位论文GATA-3在哮喘大鼠模型肺组织中的表达及其对气道炎症的作用博士研究生:邓群益导师:张珍样教授华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科中文摘要目的:探讨GATA-3转录因子在哮喘大鼠模型肺组织中的表达及其对气道炎症的作用。观察GATA-3反义寡核昔酸对哮喘大鼠模型肺组织GATA-3表达及气道炎症的影响，探讨GATA-3转录因子对GATA-3基因和工L-5基因转录作用的分子机制。探讨雷公藤内醋醇对GATA-3转录因子表达的影响，及雷公藤内酷醇对气道炎症、气道重建的影响及可能的分子机制.为

2、研究支气管哮喘的基因治疗和使用中药雷公藤内醋醇治疗哮喘气道炎症和气道重建提供实验依据。份法:选用W‘一“鼠制作哮喘模”，””哮喘组，慢性哮喘组，正常对照组，地塞米松治疗组，雷公藤内酩醇治疗组，反义寡核昔酸治疗组，无意义寡核昔酸治疗组，每组10只。根据激发反应、BALF涂片和肺组织切片HE染色及气道反应性(PC50)测定结果鉴定模型是否成功。使用免疫组化法及Western蛋白印迹法检测肺组织中GATA-3蛋白质的表达。用原位杂交法及RT-PCR方法检测GATA-3mRNA的表达。用原位杂交法检测工L-5mRNA的表达.用气道和肺组

3、织石蜡切片HE染色观察气管和肺组织炎性细胞浸润情况。用Masson改良三色染色法观察哮喘模型气道上皮下胶原沉积情况。结果:1.哮喘组大鼠肺组织GATA-3阳性细胞平均光密度值明显高于正常对照组(P<0.01)。雷公藤内醋醇和地塞米松治疗组GATA-3阳性细胞平均光密度华中科技大学同济医学院博士学位论文值明显低于哮喘组印<0.01)。雷公藤内醋醇治疗组和地塞米松治疗组相比差异无显著性(P>O.05)，两组与正常对照组相比差异亦无显著性(P>0.05).2.反义寡核昔酸治疗组肺组织中GATA-3阳性细胞平均光密度值明显低于哮喘组(P

4、O.05)。无意义寡核昔酸治疗组肺组织GATA-3阳性细胞平均光密度值略低于哮喘组，但两组相比差异无显著性(P>O.05)，无意义寡核昔酸治疗组GATA-3阳性细胞平均光密度值明显高于正常对照组(a0.01)。无意义寡核昔酸治疗组GATA-3阳性细胞平均光密度值明显高于反义寡核昔酸治疗组，两组相比差异具有显著性(PO.01).3.Western蛋白印迹法显示哮喘组GATA-3蛋白质表达水平明显高于正常对照组(PO.0l)。

5、反义寡核昔酸治疗组和地塞米松治疗组GATA-3蛋白质表达水平明显低于哮喘组(R0.01)。反义寡核昔酸治疗组蛋白质表达水平略低于地塞米松治疗组，两组相比差异无显著性(P>O.05)。反义寡核昔酸治疗组和地塞米松治疗组GATA-3蛋白质表达水平低于正常对照组，但它们之间的差异亦无显著性〔P>O.05).无意义寡核昔酸治疗组GATA-3蛋白质表达水平明显高于正常对照组(/10.0l)。无意义寡核昔酸治疗组GATA-3蛋白质表达水平低于哮喘组，但两组相比差异无显著性(P>0.05).4.大鼠肺组织GATA-3mRNA表达的RT-PCR

6、结果表明:哮喘组GATA-3mRNA的表达水平明显高于正常对照组(P0.01)。反义寡核昔酸治疗组和地塞米松治疗组GATA-3mRNA的表达水平明显低于哮喘组(fQ.01)。反义寡核普酸治疗组GATA-3mRNA的表达水平略低于地塞米松治疗组，但两组差异无显著性(P>O.05)。反义寡核昔酸治疗组和地塞米松治疗组GATA-3mRNA的表达水平略低于正常对照组，它们之间的差异亦无显著性(P>O.05)。无意义寡核昔酸治疗组GATA-3mRNA表达水平明显高于正常对照组和无意义寡核昔酸治疗组(R0.01)，无意义寡核昔酸治疗组GAT

7、A-3mRNA的表达水平低于哮喘组，但两组相比其差异无显著性(P>0.05).5.大鼠肺组织冰冻切片GATA-3原位杂交结果表明:哮喘组大鼠肺组织中GATA-3阳性细胞平均光密度值明显高于正常对照组(P<0.01)。雷公藤内酷醇和地塞米松治疗组GATA-3阳性细胞平均光密度值明显低于哮喘组华中科技大学同济医学院博士学位论文(P0.O1)。雷公藤内醋醇治疗组和地塞米松治疗组两组GATA-3阳性细胞平均光密度值相比差异无显著性(P>O.05)，两组GATA-3阳性细胞平均光密度值与正常对照组相比差异亦无显著性(P>O.05).6大鼠

8、肺组织冰冻切片工L-5mRNA原位杂交结果表明:哮喘组大鼠肺组织中工L-5mRNA阳性细胞平均光密度值明显高于正常对照组(a0.01)。雷公藤内酷醇治疗组和地塞米松治疗组工L-5mRNA阳性细胞平均光密度值明显低于哮喘组(P0.01)。雷公藤内醋醇治疗组IL-5