体外多胺微环境对人肝癌细胞HepG2转移的影响

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1、PolyaminesinvitromicroenvironmentonthetransferofHepG2cellsADissertationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineBy弛xianwuSupervisor：Prof．XieSongqiangJun，2014关于学位论文独创声明和学术诚信承诺本人向河南大学提出硕士学位申请。本人郑重声

2、明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的，对所研究的课题有新的见解。据我所知，除文中特别加以说明、标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。在此本人郑重承诺：所呈交的学位论文不存在舞弊作伪行为，文责自负。学位申请人(学位论文作者)签名：i垒玉丛鱼201年月日关于学位论文著作权使用授权书本人经河南大学审核批准授予硕士学位。作为学位论文的作者，本人完全了

3、解并同意河南大学有关保留、使用学位论文的要求，即河南大学有权向国家图书馆、科研信息机构、数据收集机构和本校图书馆等提供学位论文(纸质文本和电子文本)以供公众检索、查阅。本人授权河南大学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等目的，可以采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手段保存、汇编学位论文(纸质文本和电子文本)。(涉及保密内容的学位论文在解密后适用本授权书)学位获得者(学位论文作者)签名：主垒皿鱼201年月日学位论文指导教师签名：201年月日摘要实验目的：多胺是一种长链脂肪族化合物，天然多胺主要包括腐胺(putrescine，

4、Put)、精胺(sperrnine，spm)和精脒(亚精胺)(spermidine，spd)。多胺广泛存在于自然界，是大多数生命器官所必需的。生理性多胺在人体组织和体液中的含量非常少，而在肿瘤组织中多胺含量比正常组织中显著增加且与肿瘤的发生、发展及转移密切相关。本实验通过外加多胺来模拟人体高、正常(中)和低三种不同多胺微环境对肝癌细胞生长、侵袭、转移等能力及相关分子机制的研究。实验方法：选取人肝癌细胞HepG2作为研究对象，使用基因转染技术把Akt3基因转到HepG2细胞中。把外源性多胺按高多胺浓度(腐胺0．8nmol／mL、

5、精脒10．0nmoVmL、精胺5．0nmol／mL)；正常多胺浓度(腐胺0．08nmoVmL、精脒1．0nmoVmL、精胺O．5nmoVmL)：低多胺浓度(腐胺0．008nmol／mL、精脒0．Inmol／mL、精胺0．05nmoVmL)三组多胺分别加入含有相同培养基的HepG2细胞和HepG2．Akt3细胞中，培养15天和30天。每种细胞另设阴性对照。应用克隆形成能力实验来检测不同多胺浓度对两种不同细胞增殖能力的影响；应用Transwell迁移实验(未铺胶)来检测不同多胺浓度对两种不同细胞迁移能力的影响；运用细胞划痕实验来检

6、测不同多胺浓度对两种不同细胞伤口愈合能力的影响；运用蛋白免疫印迹实验(WesternbloO来分析不同多胺微环境对与肿瘤细胞粘附迁移、侵袭等相关的各种蛋白表达的影响，如鸟氨酸脱羧酶(omithinedecarbo．xylase，ODC)、精脒／精胺乙酰转移酶(spermidine／spermineN1-acetyltransferase，SSAT)、AKT、P27bpl、低氧诱导因子(hypoxia-induciblefactor-1a，HIFIa)、血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfact

7、or,VEGF)、钙粘附蛋白(E．cadherin)、整合素(Integrina6)、Akt3、组织蛋白酶D(CathepsinD)等蛋白的变化。实验结果：HepG2及HepG2一AKt3细胞在不同多胺微环境下显示了不同的增殖、迁移、侵袭能力，而且随着多胺浓度的升高其增殖、迁移、侵袭能力逐渐增强，并成时间剂量依赖性。HepG2．AKt3细胞在相同多胺浓度的情况下其增殖、迁移、侵袭能力比HepG2细胞显著增强。蛋白免疫印迹实验结果表明多胺是通过诱导AKt3蛋白、低氧诱导因子(HIFla)蛋白、鸟氨酸脱羧酶(ODC)、精脒／精胺乙

8、酰转移酶(SSAT)、血管内皮生长因子(VEGF)、整合素(Integrina6)、组织蛋白酶D(CathepsinD)蛋白的上调以及P27bpl蛋白、上皮钙粘附蛋白(E．cadherin)的下调等促进肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移。实验结论：高多胺微环境能够促进HepG2细胞和