CRPoxLDLβ2GPI复合物对RAW2647巨噬细胞吞噬脂质的影响

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1、分类号：R587．1密级：学位类别：科学学位口专业学位团0学校代码：1062学号：2010602598学科门类：医学又坪鼍科袁号硕士学位论文MLASTER’SDISSERTATIoN论文题目：CRP／oxLDL／IB2．GPI复合物对RAW264．7巨噬细胞吞噬脂质的影响TITL．EEffectsofCRP／oxLDL／[12一GPIcomplexesonlipidphagocytosisfunctioninRAW264．7macrophages一级学科：临床医学二级学科：内科学内分泌与代谢病论文作者：冯美俊指导教师：于德民教授导师组

2、成员：于琨主任医师天津医科大学研究生院二。一三年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。⋯一躲超日删穆别日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编

3、以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。本论文属于保密口，在——年解密后适用本授权书。不保密匡j。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者签名：蛰鲢丝日期：沙f；年夕月弓／日导师签名乒嗍列声弦了7日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：糖尿病，特别是2型糖尿病，是心血管疾病进展的独立危险因素。80％的糖尿病病人死于心血管并发症，平均寿命降低约10年。糖尿病病人体内的oxLDL／132．GPI复合物，CRP／oxLDL复合物，CRP／oxLDL／132．GPI复合物水平明显高于正常人，且CRP／oxLD

4、L复合物，CRP／oxLDL／132．GPI复合物在糖尿病合并动脉粥样硬化病人的血清中明显升高。为了明确复合物对动脉粥样硬化发生发展的影响，拟以CRP／oxLDL复合物，oxLDL／[32．GPI复合物，CRP／oxLDL／132．GPI复合物干预小鼠巨噬细胞，观察巨噬细胞内总胆固醇的堆积情况并探索其相关作用机制。方法：以RAW264．7小鼠巨噬细胞为研究对象，分别给予对照，80ug／mloxLDL，80ug／mlCRP，80ug／mlB2一GPI，80ug／mlCRP／oxLDL复合物，80ug／mloxLDL／132．GPI复合物

5、，80ug／mlCRP／oxLDL／p2．GPI的复合物干预24小时，形态学上通过油红O染色观察巨噬细胞对脂质的吞噬；并通过细胞内总胆固醇试剂盒测定各组细胞内总胆固醇的含量；通过实时定量PCR法检测A类清道夫受体(SRA)，B类清道夫受体(CD36)，B类清道夫受体I型(SR．BI)和ATP结合盒转运子AI(ABCAl)这些脂质吞噬相关基因mRNA的表达；Westernblot法检测MAPK通路中p38MAPK和ERK的表达。结果：1．油红O染色结果：给予oxLDL干预24小时后，oxLDL组中巨噬细胞内红色明显，细胞成泡沫状，表明脂

6、质在细胞内堆积，泡沫细胞模型成功；CRP／oxLDL复合物组，oxLDL／132．GPI复合物组，CRP／oxLDL／132一GPI复合物组均有泡沫细胞形成。与oxLDL组比较，CI冲／oxLDL组中油红染色红色更加明显，细胞内堆积的脂滴更多；oxLDL／p2．GPI组与oxLDL组相比细胞内的红色明显减少，可见细胞内脂质堆积量减少；CRP／oxLDL／132．GPI组细胞内的红色与oxLDL组比较变化不明显，脂质堆积量无明显差异，但细胞数有所减少。2．细胞内总胆固醇试剂盒测量结果：与对照组相比，oxLDL组细胞内总胆固醇明显增加，其

7、含量是对照组的1．99倍(尸<0．01)；CRP／oxLDL组、oxLDL／132．GPI组和CRP／oxLDL／132．GPI组细胞内总胆固醇的含量分别是对照组的4．3倍(JP<天津医科大学硕士学位论文0．01)、1．53倍(P

8、无统计学意义(P>0．05)。3．实时定量PCR结果显示：oxLDL组能够促进CD36mRNA(P<0．05)的表达和明显降低SR-BI，ABCAlmRNA(均P<0．05)的表达；与oxLDL组相比，CRP／oxLDL