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时间:2018-04-30
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1、L.caseiZhangPG对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响【摘要】目的观察干酪乳杆菌(L.caseiZhang)肽聚糖(peptidoglycan,PG)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率、吞噬指数及巨噬细胞表面C3b受体的影响。方法应用酵母菌体外吞噬法观察巨噬细胞的吞噬功能;应用伊红染色法计数酵母细胞花环(Yc-花环)形成率;应用动物实验法进行小鼠毒性试验。结果L.caseiZhangPG组腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数分别为67.69±7.08和2.11±0.39,明显高于对照组的31.22±4.18和
2、0.78±0.14,差异有显著性。L.caseiZhangPG组巨噬细胞表面Yc-花环形成率为60.01±4.02,明显高于对照组的35.07±5.71,差异有显著性。毒性试验结果显示,连续观察一周L.caseiZhangPG组小鼠,小鼠均无耸毛、消瘦或食欲不振等中毒现象。结论L.caseiZhangPG对巨噬细胞有一定的激活作用,能提高其吞噬功能,且安全可靠。【关键词】干酪乳杆菌肽聚糖巨噬细胞C3b受体 EFFECTOFL.CASEIZHANGPEPIDOGLYCANONPHAGOCYTOS
3、ISOFMICROPHAGEINMICE ShuangJie1,YongSheng1,ZhangQijin2 (1.Dept.ofpathogenbiology,QinghaiUniversityMedicalSchool; 2.CollegeofVeterinaryScienceandMedicine,InnerMongoliaAgriculturalUniversity) AbstractObjective ToinvestigatetheeffectsofL.caseiZhangpeptidoglycanontheph
4、agocytosisrate,phagocytosisindexandsurfaceC3breceptorofmicrophageinmice.MethodsThephagocyticfunctionofmicrophageingratealice.ResultsThephagocytosisrateandindexofperitonealmicrophagestimulatedbyL.caseiZhangpeptidoglycann;7.08and2.11±0.39,respectivelyandsignificant
5、lyhigherthanthoseincontrol(31.22±4.18and0.78±0.14).TheYcrosetteformationinsurfaceofmacrophageinL.caseiZhangpeptidoglycangroupn;4.02,significantlyhigherthanthatofcontrolgroup(35.07±5.71),andshoaciatedandhavingadelicateappetite,etc.andallofthemsurvive
6、d.ConclusionL.caseiZhangpeptidoglycancanactivatethemicrophing.ageandpromotethefunctionofitsphagocytosisandsafeforus. Key,10min)收集菌体;将菌体悬浮于蒸馏水中,超声处理(20min,3次),上清液差速离心(1000rpm,15min;10000rpm,20min)收集粗细胞壁;取适量粗细胞壁加SDS溶液离心(10000rpm,20min),收集粗肽聚糖;将粗肽聚糖洗净后溶于胰蛋白酶缓冲液(pH7.5)中,37
7、℃水浴振荡20h,离心(10000rpm,20min)获得酶处理粗细胞壁,粗细胞壁用无水乙醇脱水;最后悬浮在三氯乙酸溶液(10g/dL)中去除共价结合的磷壁酸,离心(10000rpm,20min)后将沉淀物用蒸馏水洗涤、用无水乙醇脱水干燥,保存。具体步骤见 1.2.4.5Yc-花环试验方法:将Yc悬液滴加于单层巨噬细胞上,平置(4℃)1h,继用缓冲液冲洗玻片,至无酵母颗粒冲下为止。加2%戊二醛固定、HE染色后,用显微镜计数细胞。以一个巨噬细胞周围附有6个或6个以上酵母菌者计作一个花环,随机观察200个巨噬细胞,计算花环形成率。 1
8、.2.5实验组小鼠急性毒性试验 以每只1、2、4mg三个梯度剂量的L.caseiZhangPG对小鼠行腹腔注射,每个剂量组注射6只小鼠,观察1周。 1.2.6统计学处理方法 采用SPSS11.0软件对各试验数据进行
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