《医学淋转试验》ppt课件

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1、T淋巴细胞转化试验(Tlymphocytetransformationtest)中山医学院免疫学教研室2011-04实验目的和要求掌握T淋巴细胞转化实验的原理掌握细胞计数的方法熟悉能引起T淋巴细胞发生转化的常用抗原性物质及其特点实验原理DNA合成分化淋巴母细胞刺激物细胞变大细胞浆扩大空泡核仁明显核染色质疏松T淋巴细胞未转化细胞过渡态细胞淋巴母细胞体外刺激物种类非特异抗原刺激物：如PHA、ConA等特异性抗原刺激物：如PPD细胞抗原和抗淋巴细胞抗体：如同种白细胞、抗淋巴细胞血清等实验方案细胞培养:外周血分离的单个核细胞与植物血凝素(PHA)混合体外培养3天观察细胞形态变化:部分T细

2、胞转化为淋巴母细胞，部分可见核有丝分裂现象判定T淋巴细胞转化率（%）实验材料肝素抗凝血Hank’s液淋巴细胞分层液PHA细胞计数板显微镜操作步骤淋巴细胞的分离用Hank’s液配成1×106细胞/ml的淋巴细胞悬液。加PHA5ug/ml分别加入24孔细胞培养板，培养72小时离心：1000rpm10分钟弃上清，用残液将沉淀细胞混匀配成悬液推片，姬姆萨染色，油镜观察阴性对照：不加PHA结果观察转化细胞：淋巴母细胞：体积大，核膜清楚，染色质疏松呈细网状，核/细胞比例变小。过渡型淋巴细胞：类似母细胞。核丝分裂相细胞：核体呈现有丝分裂，胞内可见组织染色体。未转化细胞：成熟小淋巴细胞：体积小，

3、核染色体致密，核/细胞比例大。衰老退化细胞：胞浆部分或全部破碎（不计数）未转化细胞转化细胞转化和未转化细胞特征细胞类别转化细胞未转化细胞母细胞过渡型细胞体积（um）≥12-2012-166-8细胞大小染色质核仁有丝分裂增大疏松1-4个+或-增大疏松有或无-不增大密集无-胞浆增色着色空泡伪足++嗜碱+或-+或-+嗜碱+或-+或--天青色--正常成熟淋巴细胞转化为淋巴母细胞核丝分裂相细胞转化率计算转化率＝转化的细胞数/淋巴细胞总计数计数200个淋巴细胞评价标准：60-80%为正常，50-59%为偏低，<50%为降低。Thanks!