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1、PCR检测系统分析性能验证上海市临床检验中心肖艳群1相关规定医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的指南CNAS-GLxx5.5.2)实验室应在应用于医学检验之前验证所使用的检验方法和程序的分析性能.对于定量检测项目内容至少包括正确度、精密度、可报告(或线性)范围.对于定性检测项目内容应包括灵敏度、特异性或符合率及重复性上海市医疗机构临床基因扩增检验技术审核办法临床基因扩增检验实验室在技术审核前应完成拟开展检测项目方法学验证。方法学验证实验应包括但不限于：精密度、正确度、检测限、线性范围、可报告范围、特异性试验2什么情
2、况下要做性能验证开展新项目更换检测系统:更换仪器或试剂3分析性能验证项目对配套系统,一般验证以下指标精密度准确度可报告范围参考区间对非配套系统除验证上述指标外分析灵敏度分析特异性4依据文件(CLSI文件)EP5-A2:定量测量方法的精密度性能评价EP6-A:定量测量方法的线性评价EP7-A:临床化学的干扰实验EP9-A2:用患者样本进行方法学比对及偏倚评估EP12-A2:定性实验方法评价用户协议EP15-A2:用户对精密度和准确度核实试验EP17-A:检出限和定量检出限确定方案C28-A2:医学实验室参考区间的定义和确定5性能
3、验证前的准备应熟悉待验证的检测系统应熟悉验证方案的步骤(PCR检测项目成本高、阳性标本来源困难,精密度和正确度验证可以采用EP15-A2文件)制定质量保证措施确保足够的样本数量和覆盖较宽检测范围确定比较方法6EP15-A2:精密度和准确度性能的用户验证实验室验证方法的操作与厂家的申明一致为验证重复性、实验室内精密度的申明提供方案和数据分析其他的CLSI文件为厂家做出精密度(EP5-A2)和准确度(EP9-A2)的申明提供指南7精密度验证重复性:指在相同条件(时间、操作者、仪器)下获得的精密度,也称批内精密度实验室内精密度:同一
4、实验室内，使用相同的设备,在不同时间内获得的精密度,也称总精密度.(不包括大的设备维护、仪器校准和更换试剂批号等)8实验要求试剂:同一批号实验样本以前分析过的病人样本其他已知值的物质浓度要求:医学决定水平厂家说明书精密度指标所用浓度内容重复性实验室内精密度9实验步骤根据厂家申明的精密度比例关系可分为3种情况:1)如果σ批内<2/3σ总:每天分析1批次,2个浓度,每个浓度重复测定4次,连续5天.2)如果σ批内>2/3σ总:每天分析1批次,2个浓度,每个浓度重复测定3次,连续3天.3)如果σ批内与σ总相对关系未知:每天分析1批次,
5、2个浓度,每个浓度重复测定4次,连续5天.每天做室内质控,如果失控,剔除数据,重新进行测定实验数据的统计学处理:批内标准差、实验室内标准差10结果判断重复性验证:批内标准差<厂家申明,验证通过批内标准差>厂家申明,则通过计算验证值进行差异的显著性检验,批内标准差<验证值验证通过实验室内精密度验证:实验室内标准差<厂家申明,验证通过实验室内标准差>厂家申明,则通过计算验证值进行差异的显著性检验,实验室内标准差<验证值,验证通过11准确度与正确度、精密度的关系准确度正确度均值与真值的接近程度系统误差偏倚(bias)精密度重复测量结
6、果之间的接近程度随机误差标准差(SD)12正确度验证比对方法:用临床病人样本进行方法学比对,类似EP9-A2文件参考物质13两种方法间病人标本结果的比较实验设计:1)收集20份病人样本,其浓度分布整个线性范围,不使用超出线性范围的标本2)在3-4天时间内,每天用实验和比对方法测定5-7份样本3)每天做室内质控,如果失控,剔除,问题纠正后重新测定该批标本14实验数据处理计算每个标本两种方法间结果的差异偏倚bi=实验方法结果i-比较方法结果i偏倚%=100%(实验方法结果i-比较方法结果i)/比较方法结果I画出每个标本两种方法结果
7、的偏倚或百分比偏倚图,比较两种方法间在检测的浓度范围内标本结果差异是否一致计算两种方法间的平均偏倚计算偏倚或百分比偏倚的标准差15结果判断如果偏倚<厂家指标(实验室指标),验证通过如果偏倚>厂家指标(实验室指标),则通过计算验证值进行差异的显著性检验,在验证限范围内,验证通过16选择厂家申明中使用的比较方法为本方案的比较方法如两种方法在检测的浓度范围内标本结果差异不一致,应参考EP9-A2文件(用病人标本进行方法学比对和偏倚评估)来进行实验17使用参考物质的正确度方案参考物质1)新鲜冰冻人血清或其他一些未掺入成分的人体物质:已
8、用参考方法或决定性方法定值2)从能力比对实验中获得的参考物3)厂家提供的正确度确认物或质控物4)实验室室间质评物被众多的实验室分析,他们的均值可用于评估一致性5)由第三方提供的已用一些不同方法定值的物质18实验步骤至少2个物质,浓度为可报告范围中高和低的测量范围在3-5天内每
