生物大分子仪器分析(复习提纲)

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1、生物大分子仪器分析（复习提纲）DHZ一、离子色谱1.离子色谱的分离方式：离子交换色谱（HPIC），离子排斥色谱（HPIEC），离子对色谱（MPIC）。2.碱金属的亲和力顺序为：Cs+>Rb+>K+>Na+>Li+；碱土金属的亲和力顺序为：Ba2+>Sr2+>Ca2+>Mg2+；卤素离子的亲和力顺序为I->>Br->Cl->F-。3.常见无极阴阳离子的出峰顺序：F-、Cl-、NO2-、SO42-、Br-、NO3-、PO43-、Li+、Na+、NH4+、K+、Mg2+、Ca2+。4.淋洗液的组成：阴离子分析（氢氧化物、硼酸盐、碳酸盐等）；阳离子分析（硫酸、甲基

2、磺酸等）。5.与高效液相色谱不同，离子色谱有抑制器和电导检测器；HPLC流动相一般是水、缓冲溶液和有机试剂，离子色谱流动相一般是酸、碱和缓冲溶液或者含有少量有机试剂，主要分离极性和部分弱极性化合物。6.离子交换色谱系统中主要部分：分离柱、检测器（电化学检测器，光学检测器）、抑制器（作用：降低淋洗液的背景电导；增加被测离子电导值，改善信噪比）。7.离子色谱流程（记！）：泵液→进样→分离→检测→记录。二、流式细胞仪1.流式细胞仪的组成部分：流动室和液流系统；激光源和光学系统（产生散射光和激发荧光）；光电管和检测系统（两种探测器：光电二极管和光电倍增管；两类放大

3、器：线性放大器和对数放大器）；计算机和分析系统；细胞分选系统。1.流式细胞仪系统流程：标本→激光系统→流动系统→信号处理系统→放大系统→计算机系统→结果打印。2.散射光信号：前向角散射和侧向角散射（细胞物理参数）。3.两种荧光信号：1）自发荧光：细胞自身在激光照射下发出微弱的荧光信号；2）特异荧光信号：经过特异荧光素标记细胞后，受激发照射得到的信号。4.数据处理：直方图（显示一个参数与细胞之间的关系）；散点图（常用来分析多参数数据）。分析速度10000/s；样品浓度在105~107细胞/ml的数量级。5.“设门”的概念（记！）：是指在进行检测时，所设的选择

4、区域，可以用“门”选择感兴趣的细胞群。三、毛细管电泳分离技术1.原理：是经典电泳技术与现代微柱分离相结合的产物，是离子或荷电粒子以电场为驱动力，在毛细管中按其淌度或分配系数不同进行高效、快速分离的一种电泳新技术。2.电泳淌度：单位场强下离子的平均电泳速度。因为电泳速度与外加电场强度有关，所以，在电泳中常用淌度而不用速度来描述荷电粒子的电泳行为和特性。1.毛细管区带电泳（CZE）：样品在电解液中泳动，根据物质的荷/质比差异来进行分离，比值愈大，跑得愈快。2.电泳：是指在电场作用下，溶液中的带电粒子作定向移动的现象。3.电渗：是指在电场作用下，毛细管或固相多孔

5、物质内液体沿固体表面移动的现象。4.胶束电动毛细管色谱（MECC，MEKC）：是指缓冲液中加入大于临界胶束浓度的表面活性剂而形成胶束，常用来分离中性分子。5.毛细管凝胶电泳（CGE）：将凝胶移到毛细管中作支持物进行的一种电泳。由于溶质分子体积不同，在起分子筛作用的聚合物内进行电泳时被分离，适用于生物大分子的分析及PCR产物分析。6.毛细管等速电泳（CITP）：毛细管等速电泳是根据样品的有效淌度的差别进行分离的一项电泳技术，在等速电泳中，在电泳稳态时，各组分区带具有相同的电泳速度，而且各区带相互连接。7.毛细管等电聚焦（CIEF）：根据等电点差别分离生物大分

6、子的高分辨率电泳技术。8.聚焦：具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移，分别到达满足其等电点pH的位置时，呈电中性，停止移动，形成窄溶质带而相互分离。1.毛细管电渗色谱（CEC）：在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定液，以电渗流为流动相，试样组分在两相间的分配为分配机理的电动色谱过程。2.毛细管电泳的应用：1）阴离子分析；2）药物分析；3）手性化合物分析；4）氨基酸与蛋白质分析；5）核酸分析及DNA排序；6）阵列毛细管凝胶电泳（用于人类基因DNA测序）。四、双向凝胶电泳1.蛋白质组（Proteome）：由1个细胞，或1种器官或组织的基因组所表达的

7、全部相应的蛋白质。2.蛋白质组学：研究在某个时间或某种特定条件下细胞或组织的蛋白表达及其活动规律的科学。3.双向凝胶电泳（2-D电泳）：双向凝胶电泳时利用不同蛋白质的物理、化学性质的差异，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上展开。（第一向等点聚焦：等电点；第二向SDS-PAGE：分子量）。4.双向电泳步骤（记！）：1）样品制备；2）加样；3）胶条重涨泡；4）第一向等电聚焦；5）第二向SDS-PAGE（胶条平衡）；6）染色；7）图像分析5.等电聚焦电泳：根据蛋白质等电点的不同而将它们分开的电泳方法称为等电聚焦电泳。电泳后测定其各种蛋白质“聚焦”部位的pH，

8、即可得知它们的等电点。1.SDS-PAGE：即SDS-聚丙烯酰胺凝