3、1菊花的组织培养（2016）

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1、菊花的组织培养指植物离体的器官、组织或细胞，在一定营养物质、激素和其他外界条件的作用下，发育成完整植株的一种无菌培养技术。一、植物组织培养的概念概念：原因：植物组织培养原理：植物细胞的全能性细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能。是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质什么叫分化？其实质是什么?什么叫脱（去）分化、再分化？愈伤组织的细胞有什么特点？如何控制细胞的脱分化与去分化？P33阅读32页解决下列问题：二、植物组织培养的基本过程基因的选择性表达使用植物激素人为控制外植体P34愈伤组织三、影响植物组织培养的因素：1、外植体的选取不同植物的组织

2、培养难度不同同一种植物的不同组织培养难度不同2、培养基的配制(MS培养基)大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等未开花植物的茎上部新萌生的侧枝调节渗透压3、不同植物激素使用顺序使用顺序实验结果先生长素，后细胞分裂素有利于细胞分裂但不分化先细胞分裂素，后生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高4、不同植物激素使用量生长素/细胞分裂素比值结果比值高时促根分化，抑芽形成比值低时促芽分化，抑根形成比值适中促进愈伤组织生长思考：以下培养基

3、出现的现象反应了什么问题？生长素/细胞分裂素高－－利于根的分化比例适中－－利于愈伤组织的形成生长素/细胞分裂素低－－利于芽的分化5、pH、温度、光照（菊花组培）pH=5.8温度：18—22℃每日光照12h制备MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培四、实验操作移栽冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上配制各种母液配制培养基灭毒无菌操作形态学上端朝上无菌箱，定期消毒pH=5.8温度：18－22℃每日光照12h打开封口膜－炼苗流水清洗培养基移植到蛭石或珍珠岩－壮苗移植到土壤，浇水、施肥配制各种母液大量元素：配制成10倍的母液，使用时再稀释10倍。1、按照配方表中

4、用量依次分别称取扩大10倍的量：NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4.7H2O、CaCl2.2H2O2、所有药品称取完毕后用蒸馏水逐个溶解，3、待全部溶解后，最后定容至1000ml，4、转入1000ml细口试剂瓶中，贴上标签，注明母液名称、放大倍数、配制日期，5、置于冰箱中保存备用。（根据P84的MS培养基来计算）微量元素：配制成100倍的母液，使用时再稀释100倍。激素类、维生素类以及用量较小的有机物：按1mg/mL的质量浓度单独配制成母液。1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯——灼烧）4、无菌箱

5、中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，是如何来实现无菌环境的？结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格课题延伸（略）练习P361.答：植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。2.答：外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容

6、易诱导脱分化和再分化。菊花的组织培养再分化材料性质、营养物质、调节物质、环境条件外植体的消毒接种基本原理:细胞的全能性基本过程:脱分化愈伤组织影响因素：操作流程：配制MS固体培养基培养移栽栽培