影响糖化血红蛋白测定的因素及实验室检测注意事项

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1、影响糖化血红蛋白测定的因素及实验室检测注意事项（张秀明，中山大学附属中山市人民医院检验医学中心主任）糖化血红蛋白A1c（hemoglobinA1c，HbA1c）是评价糖尿病血糖控制水平的首选指标，并且与糖尿病慢性并发症的发生和发展密切相关。近年来，许多国家糖尿病学会和WHO推荐将其作为糖尿病的首选诊断标准，拓宽了HbA1c的应用范围。然而在某些特定的情况下，尤其是当病人有血红蛋白变异体存在时常导致HbA1c测定结果的极度异常或与血糖水平不一致，甚至误导临床；而且多种因素可致HbA1c出现假性升高或降低，不能准确反映糖尿病病人血糖控制状况，影响临床诊断和治疗

2、。本文简要讨论糖化血红蛋白的生物化学特性，重点介绍糖化血红蛋白的测定方法、血红蛋白变异体对HbA1c测定的干扰，以及引起HbA1c假性升高或降低的因素，并提出实验室检测注意事项。一、HbA1c的生物化学：成人血红蛋白（hemoglobin，Hb）通常由HbA（97％）、HbA2（2.5%）和HbF（0.5%）组成。在健康人，几乎94%的HbA是非糖化的血红蛋白即HbA0，而6%的是糖化血红蛋白（glycatedhemoglobin,GHb）即HbA1。HbA1又包括HbA1a、HbA1b和HbA1c，前二者含量较少约占GHb的1%，HbA1c是主要的糖化血

3、红蛋白，约占GHb的5%。HbA1a又由HbA1a1和HbA1a2组成，两者分别是血红蛋白β链N-末端与1，6-二磷酸果糖和6-磷酸葡萄糖发生糖基化作用的产物，HbA1b是血红蛋白β链N-末端与丙酮酸的结合物，HbA1c由葡萄糖与血红蛋白β链N-末端的缬氨酸残基缩合而成。HbA1c的形成主要依赖血糖浓度和红细胞寿命。全部过程经历两个非酶促反应：第一步是快速反应期，葡萄糖粘附在血红蛋白N-末端的缬氨酸残基上，形成一个不稳定的醛亚胺中间产物即Schiffs碱；第二步是Schiffs碱经历漫长的葡糖胺（Amadori）重排反应形成稳定的酮胺化合物即HbA1c；或

4、逆向转变成葡萄糖和血红蛋白。由此可以看出，HbA1c与血液中葡萄糖浓度密切相关，因红细胞的平均寿命是120d，理论上HbA1c可反映过去120d血糖的平均水平，但在红细胞120d寿命中，近期血糖水平对HbA1c的检测值贡献更大，标本采集前30d的影响达50%，而采前集第31～90d的影响为40%，而91～120d的影响仅为10%，因此，HbA1c检测主要反映过去2～3月的平均血糖水平。9梁怀昌---糖化血红蛋白资料红细胞寿命受基因学、血液学和相关疾病等因素的影响，当解释临床结果时必须考虑这些因素，特别是能改变红细胞生成和红细胞结构的因素，临床医生应知晓这些

5、因素可能导致HbA1c假性升高或降低。二、HbA1c的测定方法：目前，市场上供实验室选用的测定HbA1c的方法至少有30余种，主要分为两大类：一类是基于糖化与非糖化血红蛋白所带电荷不同，目前常用的有离子交换层析法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）和毛细管电泳法（capillaryelectrophoresis，CE）；另一类是基于糖化与非糖化血红蛋白的结构差异，这一类包括免疫测定法（immunoassays，IA）、酶法（Enzymaticassays，EA）和亲和层析法（affinitychromatog

6、raphy，AC）。不同方法采用的原理不同，所测组分不同，但均可以按照国际临床化学和检验医学联合会（InternationalFederationofClinicalChemistryandLaboratoryMedicine，IFCC）的参考测量程序进行标化。（一）基于电荷差异的测定方法——1.阳离子交换HPLC法：是国内外最常用的分析方法，以Bio-Rad和TOSOH等厂商生产的糖化血红蛋白分析系统为代表。其基本原理是：糖化与非糖化血红蛋白所带电荷不同，对阳离子交换树脂（带负电荷）的吸附能力不同，选择洗脱缓冲液的离子强度与pH，不同组分的血红蛋白HbA

7、1a、HbA1b、HbF、HbA1c、HbA0和HbA2依次被洗脱，得到血红蛋白各组分的层析图谱。样本中HbA1c的浓度可用下式计算：GHb（HbA1c）%=GHb（HbA1c）/ΣHbA，ΣHbA包括糖化的和未糖化的HbA各组分。HPLC法最突出的优点是具有优良的精密度，而主要缺点是易受血红蛋白变异体的干扰导致HbA1c假性升高或降低。2.CE法：这是近年来发展起来的一种新技术，以法国Sebia公司的CAPILLARY2FP毛细管电泳仪为代表，其基本原理是：不同蛋白质分子在特定pH值缓冲液中所带电荷不同，通过高电压，在电渗流和电场力作用下的泳动速率也不同

8、，从而使糖化和非糖化血红蛋白得以完全分离，从阴极到阳极依次为HbA