毕业设计（论文）-峄城主栽石榴品种ISSR分子标记引物筛选

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1、学士学位论文峄城主栽石榴品种ISSR分子标记引物筛选姓名学号：1指导教师：系别：专业：完成日期：学院学士学位论文作者声明本人声明：本人呈交的学位论文是本人在导师指导下取得的研究成果。对前人及其他人员对本文的启发和贡献已在论文中作出了明确的声明,并表示了谢意。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外,不包含其他人和其它机构已经发表或者撰写过的研究成果。本人同意学校根据《中华人民共和国学位条例暂行实施办法》等有关规定保留本人学位论文并向国家有关部门或资料库送交论文或者电子版,允许论文被查阅和借阅；本人授权枣庄学院可以将本人学位论文的全部或者

2、部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其它复制手段和汇编学位论文（保密论文在解密后应遵守此规定）。作者签名：日期：年月日摘要本研究以峄城万亩石榴园的石榴幼叶为材料,采用CTAB法提取石榴基因组DNA。利用电泳和紫外分光光度法分析其完整性、纯度及浓度.利用ISSR标记技术对42个石榴品种遗传关系进行了分析。筛选出多态性高的UBC811ISSR引物，共扩增出29条DNA条带，其中多态性带7条，多态性百分率为21.12%，特异条带1条。【关键词】石榴；ISSR；种质资源；遗传多样性；亲缘关系Abstract目录第1章引言1

3、1.1ISSSR分子标记11.2本研究的目的与意义4第2章材料与仪器62.1材料62.2试剂72.3仪器设备8第3章实验方法93.1CTAB法提取DNA93.2DNA浓度和纯度测定方法103.2.1DNA质量检验方法103.2.2DNA的浓度和纯度测定方法103.3PCR扩增反应103.4电泳与成像113.5数据获取与分析11第4章结果与分析124.1石榴基因组DNA 的提取结果分析124.1.1DNA完整性分析及两种提取方法的比较124.1.2DNA纯度和浓度测定结果134.2ISSR扩增结果第5章结论与讨论185.1讨论185.

4、2结论18参考文献19致谢22石榴叶中DNA提取和RAPD体系中引物的筛选第1章引言石榴（PunicagranatumL．）为石榴科石榴属落叶灌木或小乔木，又名若榴、丹若、天浆、金罂、狂花等。石榴原产伊朗、阿富汗等中亚一带，从西汉张骞出使西域将涂林安石榴引入我国，至今已有超过2000年的栽培历史[1]，经长期天然杂交及基因突变，以及采用实生、分株、嫁接等多种繁殖方法，使其产生了复杂多样的品种和类型，据不完全统计，我国现有石榴品种资源约200多个，分布南北各地20多个省区。各地研究者对石榴种质资源进行调查研究时，大多都局限于某一地区，

5、各自从不同的角度对石榴进行了种下分类，导致品种混杂、同种异名、同名异种的现象出现[2]，长期以来，给准确进行品种资源鉴定和利用带来了困难。我们究旨在利用ISSR标记技术，对石榴的遗传多样性与亲缘关系进行分析，以期为石榴种下分类提供分子依据，为更有效地保护石榴资源及选育新品种提供遗传信息。1.1ISSR分子标记ISSR(inter－simplesequencesrepeats)即简单序列重复区间标记法，是由Zietkiewicz等1994［7］年提出的一种DNA标记技术，该技术检测的是2个相近SSR之间的一段短DNA序列上的多态性．在

6、SSR的3’端或5’端加锚1～4个嘌呤或嘧啶碱基，并以此作为引物，通常为16～18个碱基序列，对两侧具有反向排列的SSR之间的一段DNA序列进行扩增，然后进行电泳、染色，根据谱带的有无及相对位置，来分析不同样品间ISSR标记的多态性．由于ISSR引物碱基数量多，退火温度高，可重复性好，非特异性扩增少，真核生物富含SSR序列且变异最快，故ISSR扩增出的条带多且多态性要比RAPD，SSR，RFLP等更加丰富．ISSR为显性标记，符合孟德尔遗传规律，并且无需克隆、制备探针、分子杂交等工作，具有简便迅速、高效、实验成本低等优点．因此，IS

7、SR技术现已在遗传多样性［8］、亲缘关系分析［9］、遗传作图［10］、品种鉴定［11］、进化［12］等研究方面被广泛应用．ISSR被认为是研究种群遗传多样性的一种非常有效的分子标记手段［13－17］19石榴叶中DNA提取和RAPD体系中引物的筛选1.2本研究的目的与意义枣庄是我国的主要石榴产区之一,栽培面积达1.6万公顷，具有48多个种，被誉为“冠世榴园”。近年广泛开展了种质资源的调查、收集、保存和良种选育工作,并在此基础上，对峄城石榴的种、变种、品种的划分、评价、利用等问题进行了分析研究[6]。但由于长期的引种和选择,已很难从植物

8、的外部形态上来确定品种的来源和品种间的亲缘关系，存在着同名异种或同种异名的问题[8]，这给准确进行品种资源鉴定和利用带来了困难。近年来，ISSR技术在石榴品种鉴定中得到了广泛的应用，但该技术对反应条件要求十分严格,不同材料需要的引物不