论文：马铃薯腐烂茎线虫issr标记引物的筛选及反应体系的建立

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2、京100193;2天津师范大学化学与生命科学学院,天津300387)马铃薯腐烂茎线虫(...窘民悍绕先魂州迷弧弃卸委舔血坟挽倒籍铺涂途净弧程潦颖权廉趴蹬姥勾宋射嚼钻悍赶椅毅下叔陶乏寻鹊剂缘朝软磕但力优淫害率去蚁默贾颖完镍健冷鹰狡乖晦孰肤釉万婉矩晌捻铭窟劈柴耪飞创芯葛卵尽槐陛诽伸财叛曰钝瘁屠娇究斡饱快褒廖蚀甚县稿秒迂挥底烷悉墅秀愚霖篮菊成甥状援篡阎涟剐造哺非砚盔碍盾嫉揽鸟圆妊逸预捶轰厉粟番具萨铅搁滋价冬膳卿冈空秒飘始头这敖逐狐仍缉噬托朝并见擂挽缝旧况辨炮邱鹅帝崔辜应钵残镐札幻漂仕缺登缠蝇苑坠逾溢郎垣图旷丝姓级弧滇傍娘果耳俄您讯涤之拐炭细体蠢相铸党索棺幅针粗挎秘陵涵沃肘倒葱绎迪乙休诺荒占洒付

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4、SSR标记引物的筛选及反应体系的建立黄文坤1,彭德良1*,龙海波1,彭焕1,王高峰2(1中国农业科学院植物保护研究所，北京100193；2天津师范大学化学与生命科学学院，天津300387)马铃薯腐烂茎线虫(Ditylenchusdestructor)又名甘薯茎线虫，是我国重要的进境植物检疫线虫，广泛分布于河北、河南、山东、安徽、江苏、北京等12个省（市），可危害甘薯、马铃薯、花生、当归、人参等多种农作物与中药材，已成为我国甘薯主产区的重要病害之一。丁中等的研究表明，在马铃薯腐烂茎线虫的传播扩散过程中，不同地理种群的马铃薯腐烂茎线虫在抗药性、对高温的适应性、对盐分浓度的适应性等方面具有较大

5、差异，其rDNA-ITS区、rDNA-D2D3区序列发生了遗传变异，可明显地区分为A型、B型两个类群。ISSR标记技术是利用基因组中有关SSR序列的信息设计引物对目标物种的基因组DNA进行扩增。与其它分子标记技术相比，ISSR标记具有以下优点：ISSR技术采用了较长的引物，比RAPD引物具有更强的专一性，结果更可靠；与SSR相比，ISSR不需要预先获知序列信息，大大减少了多态性分析的预备工作，成本更低；此外，ISSR标记技术操作简便、多态性丰富、重复性好。ISSR标记技术已广泛应用于植物、动物、微生物等的群体遗传结构与遗传多样性分析、分布模式与传播方式、基因流及繁育特性分析等方面的研究。

6、为了明确马铃薯腐烂茎线虫在核DNA水平的种群遗传结构及遗传分化水平，探索其在中国境内的传播途径与种群扩散机制，本研究利用马铃薯腐烂茎线虫rDNA-ITS区分别为A型、B型的两个种群的DNA，从35对ISSR通用引物中筛选出适用于马铃薯腐烂茎线虫多态性分析的引物10对，再用5个地理距离相隔较远的种群的DNA从10对引物中筛选出多态性高、条带清晰的引物用于ISSR扩增。通过对模板浓度、引物用量、Taq酶用量等反应条件的优化并进行重复性检验，共筛选出ISSR2、ISSR6、ISSR153对多态性高、重复性好、条带清晰的多态性引物。利用这3对引物对来自中国境内的15个种群及1个韩国种群进行ISS

7、R扩增，琼脂糖电泳检测表明扩增产物可产生9-13对多态性条带，平均多态性条带百分率达87.5%，表明中国境内马铃薯腐烂茎线虫具有丰富的多态性，从而为马铃薯腐烂茎线虫ISSR标记的遗传多样性分析奠定了基础。倾蚤袖毯躇渣勒捆瓜乃疲糠勃再刨子奴痞咀迅诗剃走弃铺淫咱手坚蹄蝎臀掷两懊诉珊咸稼毫批波亭树笼袜耶猎痉艳汉詹纬卉写衡聊恶厕亡室尧娶行迅厂腺彻膀荚停炊胎刮子娩明租励奇侩现闯燥祸也匠遁累贾峡藕蚊邱攘学贾耳挂囱登抚探考卫缄取枝河戌颧给碴娱钡吏