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1、红花酢浆草提取物对金黄色葡萄球菌的抗菌研究学生：潘亚丽学号：200740810233指导老师：屈长青摘要：本研究通过细菌感染秀丽隐杆线虫探索红花酢浆草提取物的体内抗菌作用；用金黄色葡萄球菌感染同步化的秀丽隐杆线虫,配制含有不同浓度的红花酢浆草提取液的培养基,将感染后的线虫置入培养基上培养、观察,与普通NGM培养基培养的线虫相比较，根据线虫存活时间评价红花酢浆草提取物的体内抗菌药效；制备红花酢浆草提取物,采用圆滤纸片法测定其对金黄色葡萄球菌的抗菌效果，为新的抗菌药物的开发提供实验依据。关键词：红花酢浆草秀丽隐杆线虫同步化体内抗菌金黄色葡萄球菌体外抗菌引言秀丽隐杆
2、线虫(Caenorhabditiselegans),属于线形动物门、线虫纲动物。秀丽隐杆线虫生活在泥土中，以细菌为食，易于培养，绝大多数个体为雌雄同体，其一生可产生大约300个受精卵，只有极少数为雄性。秀丽隐杆线虫非常小,身体透明,成虫只有1毫米左右，身体直径约为70.0微米。从受精卵发育成可以产卵的成虫，它只需要3天，平均寿命大约为3周。线虫结构简单，细胞数固定，雌雄同体成虫仅有959个体细胞，雄性成虫有1031个体细胞，有302个神经细胞，大约为体细胞的三分之一。秀丽隐杆线虫虫体在5℃～30℃的温度均能生长，NGM培养基比较适合虫体生长,虫体在液氮中可以长
3、期保存。线虫因其细胞数量少、结构简单、生命周期短、易于培养、试验操作简单、通体透明、易于观察等生物学特征，而被作为现代生物学方面研究的理想模式生物，因此用秀丽隐杆线虫进行试验是一种较好的选择[1-6]。由于抗生素的出现,细菌感染性疾病得到控制，但却促进了耐药性细菌的增长，甚至出现了超级细菌，严重困扰人类的健康，这种现象迫使人们要不断开发新的抗菌药物。中药是我国特有的资源,用于治疗细菌感染性疾病已经有千年的历史,而且与抗生素相比不易产生耐药性。我国中草药具有资源丰富、种类繁多、分布广泛、不易产生耐药性、毒副作用小、取材方便、经济实惠等优点,有着很广阔的应用前景。
4、一些中草药,体外试验没有明显的抗菌效果,但确有很好的体内抗菌作用,因此对中草药抗菌功能的研究不能仅停留于体外抑菌试验,11应同时注重中草药的体内抗菌作用[7-8]。红花酢浆草(Oxaliscorymbosa)是酢浆草科、酢浆草属，多年生草本植物,株高15～25cm，地下具球形根状茎。掌状复叶,基生,具长柄,有3小叶，小叶呈倒心形。伞状花序,小花6～14朵；小花5瓣,浅粉红色。晴天早晨开放、晚上闭合,花期从4月上旬～12月中旬，达8个月。红花酢浆草因其植株整齐、花叶繁茂、花色艳、花期长等诸多优点，是校园中广泛种植的地被植物之一。红花酢浆草全草具有清热解毒、消炎止
5、痛、利湿消肿等功效，红花酢浆草根还可以清热、平肝，定惊，主治小儿肝热、惊风等症状。红花酢浆草的主要成分为有机酸、黄酮类等。杨红原等[9]研究红花酢浆草化学成分，首次从红花酢浆草中获得β-谷甾醇、胡萝卜苷、酒石酸、苹果酸、柠檬酸。本实验通过对红花酢浆草抗菌作用进行研究，希望为新的抗菌药物的开发提供实验依据[10-13]。1.材料与方法1.1实验材料N2野生型秀丽隐杆线虫(C.elegans，theBristolstrainN2)；大肠杆菌OP50（EscherichiacoliOP50）；金黄色葡萄球菌(ATCC25923)；红花酢浆草(Oxaliscorymb
6、osa)（均由抗衰老中草药安徽省工程技术研究中心提供）。1.2主要试剂、药品氯化钠（国药集团化学试剂有限公司）；蛋白胨（国药集团化学试剂有限公司）；琼脂粉（北京奥博星生物技术有限责任公司）；磷酸氢二钾（国药集团化学试剂有限公司）；磷酸二氢钾（国药集团化学试剂有限公司）；硫酸镁（国药集团化学试剂有限公司）；氯化钙（广东·汕头市西陇化工厂）；胆固醇（国药集团化学试剂有限公司）；蒸馏水（抗衰老中草药安徽省工程技术研究中心提供）；磷酸氢二钠（十二水，国药集团化学试剂有限公司）；庆大霉素（河北新张药有限公司）；氢氧化钾（国药集团化学试剂有限公司）；氢氧化钠（汕头市西陇化
7、工有限公司）；次氯酸钠（淮南市化学试剂厂）；乙醇（上海振企化学试剂有限公司）；牛肉膏（国药集团化学试剂有限公司）等。1.3主要仪器、设备自动双蒸水蒸馏器（SZ-2,上海沪西）；电子天平（FA2104N，上海民桥）；高压蒸汽灭菌锅（MLS-3750，日本Sanyo）11；超净工作台（苏州净化）；电热恒温干燥箱（上海精宏）；低温冰箱（日本Sanyo）；微波炉（KD21B，广州美的）；台式离心机（珠海黑马）；数显生化培养箱（250B，江苏金坛）；变焦体视显微镜（XTJ-4700，中国江南）；数码相机（Digimaxi6）等。1.4主要试剂配制1.4.1NGM培养基2
8、00mLNGM培养基：取一洁净的500
