腺病毒载体操作手册簿中文版解析汇报

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1、实用标准文案腺病毒载体操作手册中文版AdEasyTM操作手册目录文档实用标准文案第一章简介1第二章应用重组腺病毒的优点2第三章AdEasyTM技术33.1技术概况33.2AdEasyTM系统中产生重组腺病毒的时程3第四章主要流程44.1将基因克隆入AdEasyTM转移载体4 4.1.1克隆的一般原则4 4.1.2构建重组AdEasyTM转移载体54.2细菌内AdEasyTM重组子的产生5 4.2.1共转化的一般原则5 4.2.2共转化方法5 4.2.3预期结果54.3AdEasyTM重组质粒的筛选和扩增64.4AdEasyTM重组子转染QBI-293A

2、细胞6 4.4.1细胞铺板6 4.4.2磷酸钙转化技术7第五章常用技术85.1QBI-293A细胞培养8 5.1.1QBI-293A细胞的初始培养8 5.1.2QBI-293A细胞的维持培养和增殖8 5.1.3QBI-293A细胞的冻存85.2QBI-293A细胞的转染和病毒空斑的产生9 5.2.1感染QBI-293A细胞9 5.2.2病毒空斑形成9 5.2.3琼脂糖覆盖被感染细胞95.3MOI测定105.4腺病毒感染力测定10 5.4.1X-Gal染色115.5重组腺病毒的筛选和纯化11 5.5.1挑选最佳重组腺病毒：表达和基因输送11 5.5.2病

3、毒空斑挑选和小量扩增12 5.5.3Western杂交13 5.5.4Southern杂交和点杂交13 5.5.5病毒裂解产物PCR14 5.5.6免疫测定14 5.5.7功能测定145.6病毒颗粒在QBI-293A细胞中的大量扩增155.7两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒16 5.7.1不连续密度梯度离心17 5.7.2连续密度梯度离心17 5.7.3病毒溶液去盐和浓集175.8病毒滴度测定18 5.8.1O.D.260nm(VP/ml)19 5.8.2空斑测定法20 5.8.350%组织培养感染剂量法20第六章疑难解答226.1QBI-293A

4、细胞培养226.2感染力测定226.3转移载体克隆236.4在BJ5183细胞中共转化和重组246.5转染QBI-293A细胞256.6筛选和测定256.7在QBI-293A细胞中表达266.8重组腺病毒的扩增266.9纯化266.10病毒滴度测定27文档实用标准文案缩写英文全称中文全称AdAdenovirus腺病毒Ad5Adenovirusserotype5血清5型腺病毒AdVAdenoviralVector腺病毒载体AmpAmpicillin氨苄青霉素β-Galβ-Galactosidaseβ-半乳糖苷酶bpBasePair碱基对BSABovine

5、SerumAlbumin小牛血清白蛋白cDNAComplementaryDNA互补DNAcccDNAClosedCircularCoiledDNA闭环螺旋DNACPECytopathicEffect细胞病理效应文档实用标准文案CsClCesiumChloride氯化铯DMEMDulbecco’sModifiedEagleMediumDMEM培养基DMSODimethylSulfoxide二甲基亚砜DTTDithiothreitol二硫苏糖醇EDTAEthyleneDiamineTetraaceticAcid乙二胺四乙酸EtBrEthidiumBromi

6、de溴化乙锭FBSFetalBovineSerum胎牛血清HrHour小时ITRInvertedTerminalRepeat反向末端重复KanKanamycin卡那霉素kbKilobases千碱基对KDaKiloDaltons千道尔顿LBLuria-Bertani(broth)LB培养基MCSMultipleCloningSite多克隆位点MinMinute分钟MOIMultiplicityofInfection(Virus/Cell)感染复数mRNAMessengerRNA信使RNAMWCOMOIecularWeightCut-offPAGEPoly

7、AcrylamideGelElectrophoresis聚丙烯凝胶电泳PBSPhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液PFUPlaqueFormingUnit空斑形成单位piPostInfection感染后RCAReplicationCompetentAdenovirus增殖性腺病毒RITRRightInvertedTerminalRepeat右侧反向末端重复SDSSodiumDodecylSulfate十二烷基硫酸钠TBETrisBorate/EDTA三羟甲基氨基甲烷硼酸盐/乙二胺四乙酸TCID50TissueCultureInfec

8、tiousDose5050%组织培养感染剂量TCPTotalCellularProtein细胞