低温脂肪酶的研究____实验室发酵条件优化及酶学特性的研究 毕业论文

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1、目录摘要3前言51材料和方法61.1菌种61.2仪器61.3试剂61.3.1甘氨液体发酵基本培养基61.3.2反应底物乳化液61.3.3甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液71.3.40.05mol/L氢氧化钠溶液71.3.5测定酶液的制备71.4试验方法72主要实验操作流程及具体步骤72.1实验造作流程72.2原始培养基酶活的测定72.2.1原始培养基72.2.2酶活的测定82.2.3酶活的计算82.3正交实验82.3筛选最优培养基下微生物产低温脂肪酶的最适温度92.4不同体积装量的培养基的酶活比较92.5不同接种量培养基

2、酶活的比较92.6不同碳氮源对酶活的影响92.7不同金属对酶活的影响92.8酶学特性的的研究92.8.1pH的稳定性与最适的pH92.8.2反应温度的稳定性及最适反应温度和时间93结果与讨论93.1原始酶活的测定93.2正交实验103.3筛选最优培养基下产低温脂肪酶的最适温度及培养时间153.4不同体积装量的培养基的酶活比较163.5不同接种量培养基酶活的比较173．6不同碳氮源对酶活的影响183.7不同重金属对酶活的影响183.8酶学特性的的研究193.8.1pH的稳定性与最适的pH193.8.2反应温度的稳定

3、性及最适反应温度和时间194结论20参考文献：20谢辞2119低温脂肪酶的研究____实验室发酵条件优化及酶学特性的研究摘要：本研究以羊粪中筛选出的产低温脂肪酶的菌作为研究对象，研究其产生的低温脂肪酶的实验室发酵条件的优化及酶学特性的研究，其中实验室的发酵条件的优化包括：试剂的优化即采用缓冲液与乳化液混合后再吸取，同时对乳化液进行快速搅拌,有利于乳化液均匀分散,提高了酶的反应速度和活力；发酵培养液的优化即以原始培养基为基础做正交试验筛选出最适的培养基，并与原培养基的酶活比较；培养环境的优化即筛选最适的温度、最适装

4、量、最适接种量、最适的碳氮源、及一些常见金属离子对产酶的影响；酶学特征的的研究即pH的稳定性与最适的pH以及反应温度的稳定性及最适反应温度和时间。结果表明最是培养基为蛋白胨2%，氯化钠0.005%，氯化钙0.005%，吐温800.1%。最适培养温度为30℃、最适装量40mL、最适接种量为10%、最适碳源山梨醇、最适氮源硫酸铵、金属离子Ba2+、Mg2+、AL3+、Fe2+、Mn2+、Ca2+等会提高酶的活性，Zn2+、Ni2+、Cu2+、Co2+对脂肪酶的活性有抑制作用。最适pH为8.0，在30℃时，30min水

5、浴中此酶的酶活最高关键字：低温脂肪酶；发酵条件优化；酶学特征；优化19Theresearchoflow-temperaturelipase——laboratoryfermentationconditionsoptimizationandenzymologycharacteristicsZhujingSummary:Thestudyofproducinglipasebysheepwerescreenedforthebacteriaastheresearchobject,studyontheoptimizati

6、onoffermentationconditionsandenzymepropertiesoflaboratoryresearchonlow-temperaturelipaseproducedbytheoptimizationoffermentationconditions,whichinclude:laboratoryreagentoptimizationusingbuffersolutionandemulsionmixedafterthedraw,whiletheemulsionrapidmixing,isc

7、onducivetotheemulsiondispersed,increasedtheenzymereactionspeedandvigor;liquidfermentationoptimizationtotheoriginalmediumbasedorthogonaltestsshowedthattheoptimummedium,andmediumandYuanPeiactivitycomparison;cultureenvironmentoptimizationisscreeningthebesttemper

8、ature,theoptimumvolume,inoculumsize,carbonandnitrogensources,theoptimumandsomecommonmetalionsonenzyme;enzymaticcharacteristicsofthestudyisthestabilityofthepHandtheoptimumpHandtemperatures