大学细胞期末知识点整理

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1、细胞工程(cellengineering)是以细胞生物学和分子生物学为基础理论，采用原生质体、细胞或织培养等试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性，以获得具有新的性状的细胞系或生物体以及生物的次生代谢产物，并发展有关理论和技术方法的学科。核心技术：细胞培养与繁殖目的：获得新性状、新个体、新物质研究范畴：动物细胞与组织培养植物细胞与组织培养细胞融合细胞核移植染色体工程胚胎工程干细胞与组织工程转基因生物与生物反应器组织培养（tissueculture）习惯上泛指所有的体外培养，即器官培养、组织培养和细胞培养的总称。其本意是指从活的机体中取出组织或细胞，模拟

2、机体内生理条件，在体外建立无菌、适温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能的技术称为组织培养。细胞培养：将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，或在培养液中呈悬浮状态培养的技术器官培养：采取某些措施使器官原基，器官的一部分或者整个器官在机体外存活生长并保持其原有结构和功能的培养技术使用超净工作台应注意的几点问题①超净工作台最好安装在无尘的房间内，最好为隔离好的无菌间内，以免尘土过多易使滤器阻塞，降低净化效果，缩短使用寿命。②新安装的或长期未使用的工用台，工作前必须对工作台和周围环境用真空吸尘器或不

3、产生纤维的工具进行清洁工作，再采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。③每次使用工作台时，应先用75%酒精擦洗台面，并提前以30-50min紫外线灭菌灯处理净化工作区内积累的微生物。在关闭紫外灯后应启动送风机使之运转两分钟后再进行培养操作。④净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流型不受干扰。⑤一般情况下，高效过滤器三年更换一次。更换高效滤器应请专业人员操作，以保持密封良好。要定期将粗过滤器中的过布（无纺布）拆下清洗，时间应根据环境洁净程度而定，通常间隔3-6个月进行一次。⑥每次使用净化台要及时清除工作台面上的物品，并用洒精擦洗台面使之始终保持洁净。C

4、O2培养箱①一定浓度的CO2对细胞生长，尤其是原代培养和单细胞培养有促进作用（5%）。②一定浓度的CO2可维持培养液恒定的pH。适用于开放培养，培养箱封口后，可在一般恒温培养箱内培养，但是采用培养皿或多孔板培养时，则需要高湿度和高CO2含量的空气。③它增加了湿度，箱体内装有水浴，可以保证培养箱内的湿度。④培养箱内装有紫外灯。⑤通过气体流量计可以调节CO2和空气的比例。⑥在水中可加入防腐剂（二氧乙酸）。可防止因CO2培养箱中湿度较高，易长霉菌。玻璃器皿的清洗：浸泡：先用自来水浸泡过夜、水洗，然后再用2%-5%盐酸浸泡过夜或煮沸30min，水洗。刷洗：用软毛刷、优质

5、洗涤剂，刷去器皿上的杂质，冲洗晾干浸酸：将器皿浸泡于清洁液24h，如急用也不得少于4h。清洁液由重铬酸钾、浓硫酸及蒸馏水配制而成，具有强氧化作用，去污能力很强。冲洗：先用自来水充分冲洗，吸管等冲流10，10次以上。然后再经蒸馏水漂洗3次,不留死角。晾干或烘干备用。消毒灭菌干热灭菌适于用玻璃器皿的消毒，160-170℃，90-120min或180℃45-60min。优点：使用简便，消毒后的物品干燥，易于保存。缺点：干热传导较慢，需较长时间。蒸汽灭菌用于玻璃制品、滤器、橡胶塞、解剖用具、耐热塑料器具、受热不变性的溶液等，不同物品的有效灭菌压力和时间不同，如：培养液、

6、橡胶制品、塑料器皿等[68kPa(115℃),10min]；布类、玻璃制品、金属器械等[103kPa(121℃),15min]。优点：消毒效果好，时间短。缺点：需专人监管，不能离开人，应随时注意压力的变化。以免发生意外（手提式灭菌器）过滤除菌此法适用于消毒大多数细胞培养用液，如培养液、消化液、Hanks液、血清以及其他不能用高压蒸汽消毒的液体。用孔径0.22微米微孔滤膜可除去细菌和霉菌等。紫外线适用于无菌室、超净工作台的消毒。紫外线的波长为200-300nm，最强是在254nm，6-15平方米最少一只紫外灯，高度要在2.5m以下，湿度45%-60%，杆菌效果好，

7、球菌次之，霉菌、酵母菌最差，实验前应不低于30分钟的照射时间。优点：消毒效果好，面种大，使用方便。缺点：产生臭氧、气味难闻。熏蒸消毒适用于无菌室等房间的消毒。高锰酸钾5-7.5g，加甲醛（40%）10-15ml，混合放入一开放容器内，立即可见白色甲醛烟雾，消毒房间需封闭24小时，致少4小时以上。煮沸消毒金属器械和胶塞在水中煮20-30分钟，趁热倾去水分即可使用。紧急情况时使用。化学消毒化学药品消毒灭菌法是应用能杀死微生物的化学制品进行消毒灭菌的方法。实验室地面、桌面、用具及洗手用的溶液均常用化学药品进行消毒杀菌。2%煤酚皂溶液（来苏尔）0.25%新洁尔灭1%升汞

8、3-5%甲醛溶液75%酒