南赤瓟提取物诱导宫颈癌hela细胞凋亡及作用机制研究

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1、编辑老师:您们好!谢谢您们和审稿专家给我们的文章提出了系列宝贵的意见和建议!有您们的关心和帮助才使得我们在修改时不至于走弯路,在此向您们表示我们最诚挚的感谢!在文章修改过程中我们按照您们和专家的建议进行了认真而细致的修改和反复的阅读,并将修改的部分用红色字体进行了标记。再次对编辑老师们为此文提出的宝贵的意见和建议表示诚挚的感谢!祝编辑老师工作愉快,万事如意!此致敬礼石孟琼2012.4.16下面我们将就审稿专家和您们就此文提出的修改意见进行逐一回复和说明。该文需要修改:1)文中提及用“挥发油提取器提取挥发油和芳香成分”,作何用?请在文中交代。谢谢您和专家提出

2、的宝贵意见!其实我们用挥发油提取器是为了防止在提取过程中南赤瓟药材中的挥发性成分的丢失。在文章初稿中,我们此部分的叙述不清楚,为此我们根据您的建议进行了重新的书写,并用红色字体进行了标注。谢谢您的建议!具体修改如下:取南赤瓟药材500g,粉碎成粗粉,加10倍量蒸馏水浸泡2小时后,加热回流提取3次,每次3小时,合并滤液,3500rpm/min,离心20min,得提取液,旋转蒸发器干燥得南赤瓟浸膏,二甲基亚枫(DMSO)溶解浸膏样品配制成浓度为10mg/ml提取物药液,再以细胞培养液稀释成所需浓度,经过0.22μm孔径滤膜过滤除菌后供实验用。2.图3中DNAl

3、adder不明显,请重复实验并更换图片。谢谢!我们重复了DNAladder实验。在文章的修改稿中,并将新的图片替换了原来的图片。3)讨论部分请增加有关本研究创新性的论述。谢谢您和专家宝贵的建议!在文章的修改稿中,我们补充了该文的创新性性论述。14南赤瓟提取物诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及作用机制研究【基金项目】湖北省卫生厅中医药中西医结合科研项目(2010Z-Y09)【通讯作者】刘雄(1963-),男,汉族,学士,主任医师,主要从事肿瘤学研究.电话:0717-6912330,E-mail:石孟琼1,刘雄2,周继刚2,杨文雁1,罗涛2,熊兴军3(三峡大学医学院

4、:1基础医学实验中心,2中医临床医学院内科住院部,湖北宜昌443002;3长阳县中医院药剂科,湖北长阳443500)【摘要】目的:观察南赤瓟提取物对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制。方法:用不同浓度的南赤瓟提取物(0.10、0.25、0.50、1.00、2.00mg/mL)于不同作用时间(24、48、72h)处理宫颈癌Hela细胞后,采用MTT法检测不同浓度的南赤瓟提取物在不同作用时间下对Hela细胞增殖率的影响;用0.50和1.00mg/mL的南赤瓟提取物处理宫颈癌Hela细胞48h后Hoechst33258染色观察细胞形态变化,

5、AnnexinV-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和BaxmRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果:南赤瓟提取物对Hela细胞的生长抑制作用呈明显的时间-剂量依赖性;南赤瓟提取物(0.50和1.00mg/mL)处理能显著降低Hela细胞线粒体膜电位,促进Hela细胞凋亡(P<0.05&P<0.01);上调BaxmRNA表达,下调Bcl-2mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspa

6、se-9和Caspase-3的活性(P<0.05&P<0.01)。结论:南赤瓟提取物可诱导Hela细胞凋亡,其作用机制与降低Hela细胞线粒体膜电位及调节凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-9、Caspase-3的表达有关。【关键词】南赤瓟;宫颈癌;Hela细胞;凋亡14StudiesonapoptosisofcervixcancerHeLacellsinducedbyThldianthanudifloraHemslextractanditsmechanismofactionShiMengqiong1,LiuXiong2,ZhouJigang2

7、,YangWenyan1,LuoTao2,XiongXingjun3(MedicalCollegeofThreeGorgesUniversity:1ExperimentalCenterofBasicMedicine,2MedicalDepartmentofTraditionalChineseMedicineClinicalHospital,Yichang,HubeiProvince,443002,China;3DepartmentofPharmcy,TraditionalChineseMedicineHospital,Changyang,Hubeiprov

8、ince,443500)[Abstract]ObjectiveTo

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