蜈蚣提取物诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制的研究

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1、蜈蚣提取物诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制的研究【摘要】目的研究蜈蚣提取物对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制及其作用机制。方法观察不同浓度的不同蜈蚣提取物对宫颈癌HeLa细胞的生长抑制情况：运用体外细胞培养技术，以不同浓度的蜈蚣提取物以及阳性对照药顺铂作用于培养的HeLa细胞4h，采用MTT法测定细胞代谢率，以流式细胞术观察DNA含量和凋亡的变化情况，DNA片断化分析和WesternBlot测定Bax，Caspase蛋白水平的表达。结果HeLa细胞用4，，1mg/ml的乙醚、乙醇蜈蚣提取物处理4h后，细胞存活率显著降低；DNA周期改变明显，亚G1峰与对照组有显著性差异；DNA-Ladder典型；

2、WesternBlot提示蜈蚣提取物作用HeLa细胞后Bax，Caspase蛋白表达，凋亡率显著增高。结论中药蜈蚣乙醚、乙醇提取物在体外对宫颈癌HeLa细胞的生长有明显地抑制作用，机制与改变细胞DNA周期，促进凋亡有关。【关键词】蜈蚣提取物细胞周期DNA片断化细胞凋亡Abstract：ObjectiveTostudytheinhibitoryeffectsandmechanismofcentipedeextractonproliferationofcervicalcancercelllineobserveinhibitory-effectofdifferentconcentrationextr

3、actonthegrowthofHeLacell.BythemethodMTTtodetectcellsurvivalrate,byflowcytometrytoobservethechangeofDNAcycleandapoptosisandtoassaytheDNAfragmentationanddetecttheprotEinBax，caspasebyWesternBlotinvitrocellculture．ResultsAfterHeLacellhadbeentreatedwithconcentrationcentipedeextractbyaetherorethanol(4，，1m

4、g/ml)for8h，thesurvivalratedecreased.Thenumberofeachcyclecellschangedobviously,thesub-G1peakbetweentestandcontrolgroupwassignificantlydifferent,DNA-Ladderwastypical,theprotEInBax，Caspaseexpressing,apoptosisrateincreasedsignificantly．ConclusionCentipedeextractcaninhibitthegrowthofHeLacellwhichisrelate

5、dtoinhibitingDNAsynthesis,blockingcancercelldivisiongrowthandenhancingapoptosisinvitro.Keywords：Centipedeextraction；Cellcycle；DNAFragmentation；Apoptosis　　宫颈癌(cervicalcancer)是常见的妇科恶性肿瘤。在一些地区随着人乳头瘤病毒(HPV)感染率的上升和社会生活的变化,其发病率有增高趋势,且明显趋于年轻化,同时腺癌发病比例有所上升。　　蜈蚣为传统的动物中药材，其药用始见于XX多年前《神农本草经》。近年来得到了更广泛的应用，特别是在抗

6、肿瘤［1～3］、治疗肝炎、心血管疾病、糖尿病并发症及各种肿瘤等方面均有较好作用，引起人们对其进行更深入的研究［4～9］。本研究用蜈蚣的乙醚、乙醇提取物对宫颈HeLa细胞，增殖抑制和促进凋亡的作用及其机制进行研究，探讨蜈蚣提取成分的抗瘤活性。　1材料与方法材料细胞与试剂HeLa细胞株购自武汉大学中国典型培养物保存中心并在本院免疫学重点实验室传代保种。蜈蚣为湖北宜昌本地产，宜昌医药公司购进。阳性对照顺铂为齐鲁制药有限公司产品；RPMI-1640培养基为美国Gibco产；小牛血清为杭州四季青产品；噻唑蓝(MTT)为Sigma进口分装；DNA检测试剂盒为美国Coulter产品；鼠抗人Bax,Caspa

7、se的单克隆抗体(单抗)为美国SantaCruz公司产品。仪器及材料酶标仪，瑞士Tecan产，GENios型；流式细胞仪，美国BeckmanCoulter产，EPICSXL-4型；CO2培养箱，日本Sanyo产，MDF-75型；凝胶成像系统，美国Kodak公司产，GelLogic00型；转移脱色摇床，海门市林其贝尔仪器公司产，TS-8型；电泳仪，北京六一仪器厂，DYY-6C型；96孔和6孔板均为美