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《比较畸形菇和正常菇的实验方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、由于是比较畸形菇和正常菇，又因为畸形菇是由于C02溶度过高引起的，所以旨从呼吸作用入手，试拟了与呼吸作用相关的物质和酶的测法，探究畸形菇和正常菇的区别和联系，从而再深层次的研究畸形菇。猴头菇呼吸强度的测定(小篮子法)【实验原理】利用Ba(OH)2溶液吸收呼吸过程中释放的CO2,实验结束后，用草酸溶液滴定残留的Ba(0H)2,从空白和样品两者消耗草酸溶液之差，即可计算出呼吸过程中释放的CO?量。【器材与试剂】1•实验仪器广口瓶，温度计，酸式滴定管，干燥管尼龙网制小篮2•实验试剂0・05mol/LB
2、a(0H)2溶液(8.856g/L),指示剂(0.1%麝香草酚駄乙醇溶液),l/44mol/L草酸溶液(准确称取重结晶的草酸H2C2O4•2H2O2.865g溶于蒸憾水,配成lOOOmL,每mL溶液相当于lmg的CO?)。3•实验材料猴头菇【实验步骤】1.去两个500mL广口瓶，每个都装配一只三孔橡皮塞，一孔插入盛碱石灰的干燥管(在干燥管底部放适当脱脂棉，上置碱石灰)，以吸收空气屮的CO2,保证金如呼吸瓶中的空气无CO2,一孔插入温度计，另一孔直径约lcm,供滴定用，滴定前用小橡皮塞塞紧。瓶塞下
3、面挂一尼龙网制小篮，用以盛实验材料。2.称取两份猴头菇材料，其中一份用沸水煮死，分别装入小篮内，将小篮挂在广口瓶内，同时加0.05mol/LBa(OH)2溶液25mL于广口瓶内，立即塞紧瓶塞，防止漏气。每lOmin左右，轻轻地摇动广口瓶，破坏溶液表面的BaCO3薄膜，以利对CO?的吸收。3・lh后小心打开瓶塞，迅速取出小篮，在每个广口瓶中分别加入2滴指示剂，立即重新塞紧瓶塞。然后拔出小橡皮塞，将滴定管插入小孔中，用l/44mol/L草酸溶液滴定，直到蓝绿色转变成无色为止。分别记录滴定所耗用的草酸
4、溶液体积(mL)04.以沸水煮死的猴头菇为对照进行呼吸强度的计算。5.计算呼吸强度[CO2,mL/(g・h)]=(Vo-VP/[猴头菇鲜重(g)*X时间(h)]式中：V。为装煮死的猴头菇的广口瓶中，所耗用草酸的体积，单位是mLW为为处理的猴头菇的广口瓶屮，所耗用草酸的体积，单位是mL过氧化氢含量的测定【原理】H2O2与硫酸钛(或氯化钛)生成过氧化物一钛复合物黄色沉淀，可被H2SO4溶解后，在415nm波长下比色测定。在一定范围内，其颜色深浅与H2O2浓度呈线性关系。【仪器和用具】研钵；移液管0.
5、2mlX2支，5mlXl支；容量瓶IOmlX7个，离心管5mlX8支；离心机；分光光度计。【试剂】lOOumol/LH2O2丙酮试剂:取30%分析纯H2O257u1,溶于100ml,再稀释100倍；2mol/L硫酸；5%（W/V）硫酸钛；丙酮；浓氨水。【方法】1•制作标准曲线：取10ml离心管7支，顺序编号，并按表40・1加入试剂。表40-1测定H2O2浓度标准曲线配置表试剂（ml）离心管号1234567100umol/LH2O200.10.20.40.60.81.04°C下预冷丙酮1.00.9
6、0.80.60.40.205%硫酸钛0」0.10.10.10.10.10.1浓氨水0.20.20.20.20.20.20.23000r/min离心10min,弃去上清夜，留沉淀2mol硫酸5.05.05.05.05.05.05.0待沉淀完全溶解后，将其小心转入10ml容量瓶中，并用蒸馆水少量多次冲洗离心管，将洗涤液合并后定容至10ml刻度，415nm波长下比色。2.样品提取和测定：（1）称取猴头菇2〜5g（视H2O2含量多少而定），按材料与提取剂1:1的比例加入4°C下预冷的丙酮和少许石英砂研磨
7、成匀浆后，转入离心管3000r/min下离心lOmin,弃去残渣，上清液即为样品提取液。（2）用移液管吸取样品提取液1ml,按表35-1加入5%硫酸钛和浓氨水，待沉淀形成后3000rpm/min离心lOmin,弃去上清液。（3）向洗涤后的沉淀中加入2mol硫酸5ml,待完全溶解后，与标准曲线同样的方法定容并比色。3.结果计算：CxV7植物组织中H2O2含量（卩mol/gFw）=FWxVi式中C—标准曲线上查得样品中H2O2浓度（umol）；V（—样品提取液总体积（ml）；W—测定时用样品提取液体
8、积（ml）；FW—植物组织鲜重（g）o二、过氧化氢酶的活性测定一一紫外吸收法【原理】H2O2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度（A240）随反应吋间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测岀过氧化氢酶的活性。【仪器与用具】紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支,2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；【试剂】0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯毗咯烷酮）；0.1mol/LH2O2（用0.1mol/L高
